LINC00665靶向miR-761调控Wnt/β-catenin信号通路影响胶质瘤细胞增殖、细胞周期分布和凋亡

摘要

目的 探讨LINC00665对胶质瘤细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响和分子机制.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人脑正常胶质细胞HEB和3种胶质瘤细胞(U-251MG、A172、SHG139)中LINC00665和miR-761的表达水平.利用脂质体转染法将LINC00665小干扰RNA、miR-761模拟物分别转染A172细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡以及细胞周期的分布情况;蛋白质印记(Western Blot)检测Ki-67、细胞周期素D1(CyclinD1)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)蛋白的表达水平.双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证LINC00665对miR-761的靶向调控关系.Western Blot检测LINC00665靶向miR-761对Wnt/β-catenin信号通路的影响.结果 与HEB比较,3种胶质瘤细胞中LINC00665的表达水平显著升高,miR-761的表达水平显著降低(P<0.05).沉默LINC00665或过表达miR-761均可降低A172细胞Ki-67和CyclinD1的表达水平,升高Cleaved caspase-3的表达水平,抑制细胞增殖,引起细胞周期G0-G1期阻滞,诱导细胞凋亡(P<0.05).miR-761是LINC00665的靶基因,LINC00665负性调控miR-761的表达水平.抑制miR-761表达部分逆转沉默LINC00665对A172细胞增殖、凋亡以及细胞周期分布的影响(P<0.05).沉默LINC00665可抑制β-catenin和c-myc表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路活化,抑制miR-761表达可逆转沉默LINC00665对Wnt/β-catenin信号通路的影响(P<0.05).结论 沉默LINC00665通过上调miR-761抑制Wnt/β-catenin信号通路可引起胶质瘤细胞G0-G1期阻滞,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡.