人Survivin蛋白的纯化、单克隆抗体的制备及在肿瘤细胞的表达

摘要

目的 表达人Survivin重组蛋白、制备单克隆抗体及检测Survivin在多种肿瘤细胞中的表达.方法 诱导含有pMS-Survivin重组质粒的E.coli.表达人MS2-Survivin重组蛋白,并作为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,经ELISA双筛,获得稳定分泌抗人Survivin mAb的杂交瘤细胞株.ELISA检测Survivin mAb的特异性.免疫细胞化学检测多种肿瘤细胞中天然Survivin的表达情况.结果 诱导菌在相对分子质量为30 KD左右表达出一新的蛋白条带.筛选出2株稳定分泌特异性抗人Survivin mAb的杂交瘤细胞株,亚类鉴定均为IgG1类.两株单克隆抗体的效价均达到6.4×105.ELISA结果显示出抗人Survivin mAb的特异性.在胃癌细胞、肺癌细胞、宫颈癌细胞中均强表达,且主要在细胞浆中.结论 成功制备出特异性抗人Survivin mAb,为以后应用于临床检测奠定了基础,也为其进一步开发成诊断性试剂盒奠定了基础.