人源性天然噬菌体展示文库的构建及鉴定

摘要

目的:构建人源性天然噬菌体展示文库并对文库进行鉴定.方法:从未经主动免疫健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA,用直接PCR及半巢式PCR扩增人抗体重链(VH)及轻链(Vκ和Vλ)可变区基因.采用改进的重叠延伸PCR法将VH基因和VL(Vκ和Vλ)基因连接成人单链抗体(scFv)基因,并将scFv文库基因克隆到噬菌体载体pCANTAB-5E中,电转化E.coli TG1,构建单链抗体文库.结果:采用直接PCR和半巢式PCR扩增得到42条VH基因片段,16条Vκ基因片段,18条Vλ基因片段.混合的VH和VL等摩尔比连接后,产生的单链抗体文库基因大小为750 bp左右;转化后构建了文库容量为1.35×108的单链抗体文库.BstN Ⅰ酶切分析文库中的单链抗体基因结果显示,酶切得到的scFv指纹图谱均不相同.结论:构建的抗体文库多样性好,可用于多种人源性单链抗体的筛选.