天然人源性单链抗体文库的构建及鉴定

摘要

目的构建天然人源性单链抗体(scFv)文库,并对文库质量进行鉴定。方法采集220份未经主动免疫健康人外周血,分离单个核细胞后提取总RNA,逆转录成cDNA,混匀,以此为模板PCR扩增人抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL,包括Vκ和Vλ),再经过overlap-PCR法,将VH基因和VL基因随机拼接成人scFv基因文库后,插入噬菌体载体pComb3XSS中,电转化大肠杆菌XL1-Blue制备scFv文库。通过菌落数量计算库容,并随机挑选100个单菌落验证scFv基因阳性克隆率,基因测序分析scFv文库基因的多样性。结果经过1次电转化得到容量为1.8×108的scFv文库,scFv基因阳性克隆率为96%,其中78%为正确插入,其scFv基因序列均不相同。结论成功构建了一种大容量、多样性高的天然人源性scFv文库,为进一步筛选特异性中和抗体提供了基础材料。