化学合成经修饰抗TIMP-2小干扰RNA对活化HSCs合成分泌ECM影响

摘要

目的 观察化学合成经修饰抗金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)小干扰RNA(siRNA)对活化肝星状细胞(HSCs)合成分泌细胞外基质(ECM)的影响.方法 针对TIMP-2靶基因化学合成siRNA 366和siRNA 687,分别以不同浓度和不同时间转染活化HSCs,筛选基因沉默效率较高的一对.再将此siRNA以不同浓度作用于活化HSCs,检测培养细胞上清液中透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和羟脯氨酸(Hyp)含量,采用荧光实时定量PCR检测TIMP-2、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原纤维(COLⅠ)和Ⅲ型胶原纤维(COL Ⅲ)mRNA的表达,western印迹检测TIMP-2蛋白表达.结果 siRNA 687对TIMP-2的沉默效率高于siRNA 366.在活化HSCs中应用化学合成经修饰抗TIMP-2 siRNA后,各siRNA组α-SMA、COL Ⅰ和COL Ⅲ的表达显著降低,且培养细胞上清液中HA、PCⅢ和Hyp的含量也随之减少.结论 化学合成经修饰抗TIMP-2 siRNA能够高效抑制TIMP-2的表达,减少HSCs分泌合成ECM,抑制HSCs活化,是治疗肝纤维化的潜在有效方法.