化学合成经修饰抗TIMP-2小干扰RNA对CCl_4诱导肝纤维化动物模型的影响

摘要

目的:研究化学合成经修饰抗金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)小干扰RNA(siRNA)对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的影响及其作用机制.方法:SD大鼠42只随机平均分成7组:正常组、阴性对照组、假手术组、模型组,治疗组(分3组,分别用0.05、0.1、0.2mg/kgsiRNA尾静脉注射).以400mL/LCCl4(3μL/g)sc诱导大鼠肝纤维化.8wk后所有动物取肝组织标本,测门静脉血压(PVP)并经腹主动脉取血.常规HE染色和VanGieson(VG)胶原染色,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CIV)和羟脯氨酸(Hyp).应用荧光实时定量PCR法检测TIMP-2、Ⅰ型胶原纤维(COLⅠ)、Ⅲ型胶原纤维(COLⅢ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达.应用Westernblot或明胶酶谱法检测TIMP-2、α-SMA和MMP-2蛋白的表达.结果:各治疗组在应用抗TIMP-2siRNA治疗后组织学病变减轻,PVP较模型组降低(2.2±0.1,1.9±0.1,1.6±0.1kPavs2.7±0.1kPa,P<0.05),血清ALT和AST减少(2089.3±154.5,1869.8±138.0,1422.5±139.7nkat/Lvs2717.2±193.8nkat/L,P<0.05;3634.1±242.7,2739.4±141.3,2286.6±145.5nkat/Lvs4067.5±251.5nkat/L,P<0.05),反映肝纤维化指标的HA,LN,PCⅢ,CIV和Hyp均显著低于模型组(176.0±10.2,160.6±9.3,109.9±9.4μg/Lvs206.3±17.0μg/L,P<0.05;93.1±8.2,71.4±7.5,55.9±7.3μg/Lvs116.6±10.8μg/L,P<0.05;71.2±6.1,64.1±5.1,53.6±4.3μg/Lvs91.2±8.9μg/L,P<0.05;64.3±5.4,50.7±5.8,41.6±4.4μg/Lvs80.3±6.8μg/L,P<0.05;328.7±17.6,279.7±16.3,230.4±16.1μg/gvs380.7±20.6μg/g,P<0.05).各治疗组TIMP-2,COLⅠ,COLⅢ和α-SMAmRNA的表达较模型组明显减少(7.53±0.83,5.04±0.75,1.30±0.49vs23.23±2.14,P<0.05;33.38±2.85,22.80±2.48,11.45±1.27vs43.18±3.32,P<0.05;19.23±1.95,13.21±1.35,10.11±1.09vs25.90±2.23,P<0.05;23.76±2.06,15.33±1.25,10.53±1.02vs34.85±3.16,P<0.05),且TIMP-2,MMP-2和α-SMA蛋白的表达也相应减少(23.27±3.06,14.13±1.86,9.16±1.33vs44.83±5.45,P<0.05;23.80±2.14,15.58±1.52,9.52±0.93vs39.90±3.23,P<0.05;24.58±2.59,19.29±2.31,13.40±1.98vs57.19±7.07,P<0.05).结论:化学合成经修饰抗TIMP-2siRNA能显著降低TIMP-2的表达,促进细胞外基质的降解,抑制肝星状细胞的活化.