hTERT基因短发夹状RNA表达载体对肾癌细胞生长的抑制作用

摘要

目的观察针对hTERT基因的短发夹状RNA（shRNA）表达载体pSilencer-hTERT对人肾癌细胞及移植瘤生长的抑制作用。方法（1）pSilencer-hTERT转染人肾癌Ketr-3细胞,1、3、5、7d后逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白印迹技术检测hTERT mRNA、蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,原位末端标记法检测凋亡。（2）BALB/C-nu裸鼠接种Ketr-3细胞成瘤,瘤内分别注射pSilencer- hTERT（50μg）、空质粒pSilencer 1.0-U6（50μg）及等体积（100μl）生理盐水,隔日1次,共7次。治疗结束后第3天处死小鼠,取瘤组织检测肿瘤体积,免疫组织化学染色检测hTERT表达。结果（1） pSilencer-hTERT转染3 d后Ketr-3细胞hTERT mRNA表达（43.2±4.4）%、蛋白表达（42.6±5.6）%最低,细胞增殖抑制率（37.3±6.6）%、凋亡细胞阳性率（30.5±4.7）%最高,分别与空质粒对照组[（98.8±4.7）%、（98.0±3.7）%、（3.3±0.9）%、（10.4±2.4）%]比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。（2）pSilencer-hTERT处理组小鼠肿瘤体积（62.4±36.5）mm~3减小,hTERT表达率（65.7±4.7）%降低,分别与空质粒对照组（83.2±38.7）、（90.7±4.2）%比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论pSilencer-hTERT能有效、持续抑制人肾癌Ketr-3细胞及裸鼠肾癌移植瘤生长。