肾癌细胞中环氧合酶-2的表达及非甾体类抗炎药NS398对肾癌细胞生长抑制作用的研究

摘要

环氧合酶(cyclooxygenase，COX)是催化花生四烯酸转化为前列腺素的关键酶，有两种基因型：结构型COX-1和诱导型COX-2。由于结构的差异以及在细胞内分布的不同，它们在人体内有着不同的生理功能。COX-1在大多数组织中呈相对稳定的结构型表达，具有保护胃肠道避免损伤和调节肾脏血流等作用。COX-2在许多正常组织中不表达，但在诸如有丝分裂原的刺激、生长因子、细胞因子、致癌物质的诱导下过表达，导致在炎症及恶性组织中前列腺素的合成增加。 研究证明，COX-2在许多人类恶性肿瘤组织中表达显著上调，在肿瘤的发生发展中起到重要的作用，具有刺激细胞分化、促进血管形成、增强肿瘤的侵袭性、增进免疫抑制从而抑制凋亡等作用。许多研究表明，非甾体类抗炎症药(Non-SteroidalAnti-inflammatoryDrugs，NSAIDs)能诱导各种肿瘤细胞凋亡、抑制其生长。NS398是高选择性COX-2抑制剂，对COX-2有较强的抑制作用。本研究旨在研究COX-2在肾癌细胞中的表达情况，通过NS398作用肾癌细胞来探讨NSAIDs对肾癌细胞增殖作用的影响及其可能的作用机制。 方法： 采用标准的细胞培养方法对人肾癌786-0细胞进行培养，将NS398分别以25μM、50μM、100μM、150μM及200μM的终浓度加入细胞中作用24及48小时后，应用MTT法检测NS398对肾癌细胞增殖的影响；将NS398以上述的各种浓度作用于肾癌786-0细胞24小时后，用流式细胞仪测定细胞凋亡的情况；将NS398以各种浓度作用肾癌786-0细胞24小时后，应用EIA法测定细胞中PGE2含量的变化；各种浓度的NS398作用肾癌细胞24小时后，应用RT-PCR法检测细胞中COX-2及Bcl-2mRNA的水平，WesternBlotting法测定COX-2及Bcl-2蛋白表达的情况。 结果： NS398对肾癌786-0细胞具有较强的抑制作用，且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增大，呈浓度依赖关系(P＜0.05)；NS398作用肾癌786-0细胞24h后，在细胞周期G0/G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰，随着浓度升高，凋亡峰亦越来越增高(P＜0.05)；NS398可抑制PGE2释放，并且这种抑制作用呈剂量效应(P＜0.05)；RT-PCR和WesternBlot结果表明，不同浓度NS398作用下的肾癌786-0细胞中，COX-2无论在mRNA水平还是在蛋白水平，都明显减弱，且呈剂量梯度下降，同时Bcl-2mRNA及其蛋白表达水平也以剂量依赖方式随之下降。 结论： 选择性COX-2抑制剂NS398通过诱导凋亡来抑制肾癌786-0细胞的增殖；肾癌786-0细胞中COX-2mRNA及其蛋白表达上调，COX-2在肾癌的发生发展过程中可能起到重要的促进作用；NS398诱导肾癌786-0细胞的凋亡的作用机制是多途径的，NS398可能通过抑制COX-2的表达，降低肾癌786-0细胞PGE2的合成，减少前列腺素对肿瘤细胞增殖的刺激作用来抑制增殖和促进凋亡的；NS398也可能通过抑制COX-2，下调了Bcl-2的表达、导致肾癌细胞的凋亡。综上所述，我们认为COX-2可以作为肾癌药物治疗新的靶基因，NS398对表达COX-2的肾癌可能具有良好的治疗效果，为临床上提高肾癌综合治疗效果、开发肾癌化学治疗和预防的药物提供有效的治疗手段和理论依据。

目录

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中文论著摘要

英文论著摘要

英文缩略语

前 言

实验材料与方法

结果

讨 论

结 论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综 述环氧合酶-2与非甾体类抗炎药在肿瘤相关研究中的进展

在学期间科研成绩

致 谢

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