氧化衰老、细胞外基质和光感受器外节膜盘对RPE细胞中黏着斑激酶表达的影响

摘要

背景脉络膜新生血管（CNV）是引起视力障碍的重要原因之一，发生机制复杂。黏着斑激酶（FAK）在调控细胞增生、存活、移行和分化等细胞进程中发挥重要作用，参与新生血管的应答。然而，FAK在CNV发生中的作用尚未见相关报道。目的观察氧化衰老、细胞外基质（ECM）成分和吞噬光感受器外节膜盘（POS）等CNV生成相关因素作用下人视网膜色素上皮（RPE）细胞中FAK的表达及磷酸化变化，探讨FAK在CNV发生中的作用。方法体外原代培养来自于供体眼的人RPE细胞，并分别暴露于H2O2氧化衰老、吞噬POS和ECM成分等刺激因素。用10、20、50、100μmol／L4种浓度的H2O2处理培养的RPE细胞20d，诱导RPE细胞氧化衰老；用含终密度1×106／mlPOS的培养液培养RPE细胞20d，设置正常细胞对照组、单纯POS处理组、200μmol／LCoCl2缺氧组及POS＋缺氧组；将RPE细胞接种于涂布100mg／L的纤维连接蛋白（FN）、层黏连蛋白（LN）和I型胶原酶的培养皿中，分别继续培养30rain和1h。在不同时间点收集细胞提取总蛋白，Western blot法观察不同时间点RPE细胞中FAK的表达及磷酸化FAK（pFAK）变化。结果20μmol／L及50μamol／LH2O2处理组FAK蛋自在RPE细胞的表达量明显高于对照组，而pFAK在各H2O2处理组均较对照组明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．01）。长期吞噬POS后，RPE细胞内出现消化不完全的溶酶体颗粒；单纯POS处理组与对照组间RPE细胞中FAK和pFAK的表达量差异无统计学意义（P〉0．05），但单纯缺氧组FAK和pFAK的表达量较对照组均升高，POS＋缺氧组pFAK的表达较单纯缺氧组显著升高，差异均有统计学意义（P〈O．01）。与对照组比较，在FN、LN和I型胶原刺激后1h，RPE细胞中pFAK表达上调，差异均有统计学意义（P〈0．05，P〈O．01）。结论在衰老、吞噬POS和ECM成分等因素作用下，RPE细胞中出现FAK的表达及磷酸化．提示FAK在CNV发生过程中发挥调控作用。