视网膜色素上皮

摘要： 中心性架液性脉络膜视网膜病变(central serous chorioretinopathy,CSC)的发病机制是由于脉络膜循环异常和静水压升高引起的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)破坏,导致黄斑中心区浆液性视网膜脱离(serous retinal detachment,SRD)^([1])。CSC的治疗方法尚无共识,临床上常用的治疗方法包括观察,利尿剂,激光治疗和光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)。

摘要： 目的:比较三种方法建立外伤性增生性玻璃体视网膜病变(TPVR)兔模型的效果。方法:青紫蓝兔24只,共48只眼,在均造成眼外伤的基础上随机分成4组,每组各12只眼:实验组3组,分别为富血小板血浆(PRP)组[玻璃体腔内注射0.3 mLPRP]、转化生长因子β_(2)(TGF-β_(2))组[玻璃体腔内注射0.3 mLTGF-β_(2)(50μg/L)]和视网膜色素上皮(RPE)组[玻璃体腔内注射0.3 mLRPE细胞(1.5×10^(9)/L)],以及对照组(玻璃体腔内注射0.3 mL生理盐水)。术后每周通过眼底照相和B超观察玻璃体及视网膜的增生情况;术后第4周采用Westernblot法检测玻璃体内视网膜增生过程中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,采用冰冻切片法在显微镜下观察各组视网膜组织结构。结果:术后第4周,对照组及3组实验组TPVR的平均分级分别是0、3.67、2.33和2.50,3组实验组病变级别显著高于对照组(P0.05);术后第4周,各实验组玻璃体内视网膜α-SMA表达均高于对照组(P<0.05);术后第4周,各实验组视网膜切片显示视网膜增生程度均高于对照组。结论:在造成眼球穿通伤的基础上,玻璃体腔内注射RPE细胞、PRP和TGF-β_(2)均能造成兔TPVR,其中玻璃体内注射PRP的建模效果最明显。

摘要： 年龄相关性黄斑变性(age related macular degeneration,AMD)是我国社会威胁老年人群视觉健康的重要疾病之一。近年来,国内外研究均把血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)A作为湿性AMD治疗的主要靶点。实际上,VEGF-A是维持全身血管系统平衡的重要生长因子。在眼部各种细胞因子及补体的调节下,VEGF-A起到了维持视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)及脉络膜功能的重要作用。单纯抗VEGF治疗而不考虑维持生理剂量的VEGF水平对于湿性AMD的治疗可能弊大于利。在充分认清VEGF-A与RPE、脉络膜的相互作用关系基础上,进行深入开发,或许在未来能够进一步提升湿性甚至干性AMD的治疗效果。

摘要： 增殖性玻璃体视网膜疾病(PVR)是孔源性视网膜脱离(RRD)及其术后产生的严重并发症。PVR发生机制尚未完全阐明,主要涉及多种视网膜细胞的活化及过度增殖。目前,PVR的治疗方法单一,手术是PVR最主要的治疗手段,但手术并不能预防和阻止眼内细胞过度增殖,因此迫切需要探索不同的治疗方法。本文就不同视网膜细胞在PVR进程中的作用机制及动物模型的进展进行概述,以期为探索各种不同治疗方法提供依据。

摘要： 视网膜视觉信号处理与近视的发生发展关系密切,其中视网膜离子通道活动在近视相关信号通路中扮演着一定角色。近年来发现,视网膜钾离子的转运参与了眼部屈光发育和近视的形成。本文从视网膜钾离子转运与屈光发育和参与近视形成的可能机制、视觉相关视网膜钾离子通道,以及近视相关钾离子通道基因等方面对这一领域的相关研究进行综述。

摘要： 目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含Pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体在高糖诱导人视网膜色素上皮细胞ARPE-19增生及凋亡中的作用及机制。方法将体外培养的ARPE-19细胞分为正常对照组和高糖组,分别用常规培养液和含终浓度30 mmol/L葡萄糖培养液培养48 h,采用荧光探针检测各组细胞活性氧簇(ROS)含量,采用生物化学检验法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力值及丙二醛(MDA)浓度。取正常对照组和高糖组细胞分别加入0、2、5、10、15和20μmol/L NLRP3抑制剂CY-09培养48 h,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞的增生率,选取CY-09作用的适宜浓度。将细胞分为正常对照组、正常+CY-09组、高糖组和高糖+CY-09组,其中正常+CY-09组和高糖+CY-09组细胞培养液中添加15μmol/L CY-09进行培养,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,采用Western blot法检测各组NLRP3、凋亡相关点状蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白水解酶1前体(pro-Caspase-1)及活化片段(cleaved-Caspase-1),凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白水解酶3前体(pro-Caspase-3)及活化片段(cleaved-Caspase-3)的相对表达量。结果高糖组细胞中ROS荧光强度值为120020±3245,MDA浓度为(4.92±0.09)nmol/mg,明显高于正常对照组的35426±811和(1.78±0.03)nmol/mg,高糖组细胞中SOD活力值为(35.65±1.22)μmol/(min·mg),明显低于正常对照组的(74.96±1.41)μmol/(min·mg),差异均有统计学意义(t=35.760、46.960、29.830,均P0.05)。高糖组细胞凋亡率为(21.68±0.41)%,明显高于正常对照组的(6.67±1.05)%和高糖+CY-09组的(13.96±0.07)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。高糖组NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1、cleaved-Caspase-3和Bax蛋白相对表达量较正常对照组明显升高,Bcl-2蛋白相对表达量较正常对照组明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);正常+CY-09组和高糖+CY-09组与正常对照组和高糖组比较,NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量下降,Bcl-2蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论NLRP3炎症小体通过ROS/NLRP3/Caspase-1信号通路介导了体外高糖环境诱导RPE细胞的凋亡过程。

摘要： 目的探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)导致的视网膜损伤是否与Toll样受体-4(TLR-4)/MyD88通路激活和活化小胶质细胞使其极化为M1表型相关。方法雄性C57BL/6小鼠分为两组,实验组小鼠视网膜下注射1μL ox-LDL,对照组小鼠注射等体积的磷酸盐缓冲液(PBS);2周后,采用免疫荧光染色检测视网膜小胶质细胞的离子钙结合适配器分子1(Iba-1)、iNOS的表达,TUNEL染色检测光感受器细胞凋亡,OCT检测视网膜外核层(ONL)和内核层(INL)厚度,ERG检测视网膜功能,qPCR检测视网膜Iba-1、TLR-4和MyD88的mRNA和蛋白表达。体外实验使用ARPE-19细胞,ox-LDL组细胞用100 mg·L^(-1) ox-LDL处理24 h,PBS组细胞使用等体积的PBS处理24 h;TUNEL染色检测细胞凋亡,Western blot和qPCR检测细胞TLR-4和MyD88的mRNA和蛋白表达。结果qPCR和Western blot检测结果均显示,与对照组相比,实验组小鼠视网膜中TLR-4、MyD88、Iba-1的mRNA和蛋白表达水平均升高(均为P<0.05);与PBS组相比,ox-LDL组ARPE-19细胞中TLR-4、MyD88的mRNA和蛋白表达水平均升高(均为P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,实验组小鼠视网膜中的Iba-1、iNOS阳性细胞数均显著增加。TUNEL染色结果显示,与对照组相比,实验组小鼠视网膜中TUNEL染色阳性细胞数增加;与PBS组相比,ox-LDL组ARPE-19细胞中TUNEL染色阳性细胞数增加。ERG检测结果显示,实验组小鼠视网膜的a波和b波振幅均较对照组降低(均为P<0.001)。OCT检测结果显示,与对照组相比,实验组小鼠视网膜的ONL/INL比值下降(P<0.01)。结论ox-LDL会引起视网膜损伤,其机制可能与激活TLR-4/MyD88通路,并且使小胶质细胞活化并极化为M1表型有关。

摘要： 视网膜色素上皮(RPE)是由一层六角形、高度专业化的色素上皮细胞构成的上皮组织。其顶侧与感光器相互作用,基底侧与Bruch膜和脉络膜毛细血管相连接,以维持视网膜光感受器功能。分布在RPE细胞间的多种连接蛋白是RPE执行正常功能的基础,确保RPE的完整性和生理功能。病理状态下,RPE功能发生异常前首先出现连接蛋白异常,导致细胞间、细胞与基底膜间失去附着,随后出现一系列异常生物行为,如RPE细胞游离、迁移、转分化以及蛋白表达变化等,成为触发诸多眼底疾病的重要原因。本文将近年关于RPE连接复合体在正常和疾病状态中的作用进行概述,通过RPE细胞间连接蛋白的组成和相互关联,阐述其在增生性玻璃体视网膜病变、年龄相关性黄斑变性和糖尿病视网膜病变中的作用。

摘要： 例1,患者,男,56岁,因咳嗽、发热10 d于2020年5月28日收入江苏省苏北人民医院呼吸科。患者诉3个月前在外院诊断双眼小柳-原田病,先后予以全身糖皮质激素、环孢素、阿达木单抗治疗,但仍反复发作。眼科会诊:最佳矫正视力(best corrected visual acuity,BCVA)右眼0.3,左眼1.0,双眼角膜透明,KP(-),房水闪辉(+),玻璃体轻度混浊,右眼后极部视网膜水肿(图1A),左眼后极部视网膜静脉稍迂曲扩张(图1B)。光相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT)结果示双眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)层有高反射物质沉积,右眼黄斑区视网膜浆液性脱离(图1C,D)。荧光素眼底血管造影(fluorescein fundus angiography,FFA)和吲哚菁绿血管造影(indocyanine green angiography,ICGA)检查示双眼多灶性脉络膜炎,双眼视网膜血管炎(图1E,F)。入院后呼吸科检查:T细胞斑点检测(T cell spot test,T-SPOT)阳性;支气管镜活检结果示左主、左上下叶支气管结核(炎症浸润+肉芽增生型),痰结核分枝杆菌DNA(+)。诊断:活动性肺结核,双眼结核相关葡萄膜炎。追问病史,患者首诊原田病使用糖皮质激素治疗前T-SPOT阳性,未处理。患者转传染病医院予以正规抗结核治疗,并停用糖皮质激素、环孢素、阿达木单抗。抗结核治疗后2周复查,双眼BCVA 1.0,右眼前房闪辉(-),OCT提示右眼黄斑区浆液性视网膜脱离已复位(图1G)。患者经正规抗结核治疗后3个月复查,肺部活动性结核病灶稳定,双眼视力1.0,RPE层高反射物质较前减少;1年后停药,随访近1年未复发。

摘要： 目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUMSC)源外泌体对高糖环境下ARPE-19细胞自噬及VEGF表达情况的影响.方法:原代培养hUMSC,分离纯化hUMSC外泌体,Western blot鉴定hUMSC外泌体标志蛋白CD63表达,透射电镜观察外泌体形态.将体外培养的ARPE-19细胞随机分为对照组、高糖组和外泌体+高糖组(75μg/mL外泌体预处理).培养48h后,电镜观察三组细胞内自噬体的超微结构,MTT法检测各组细胞增殖情况,Western blot检测各组细胞中自噬标志性蛋白LC3B、Beclin-1及p62的表达,ELISA法检测细胞上清液中VEGF的质量浓度.结果:分离纯化后的外泌体为直径30～100nm的球状膜性囊泡,表达特异性标识蛋白CD63.外泌体+高糖组中自噬体的数量明显少于高糖组.外泌体+高糖组的细胞增殖率较高糖组明显升高(P<0.01).对照组、高糖组、外泌体+高糖组细胞中LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1和p62值分别为(0.214±0.019、0.461±0.067和0.332±0.079),(0.186±0.029、0.615±0.044和0.464±0.046)和(0.771±0.051、0.364±0.016和0.547±0.039).高糖组细胞中LC3B-Ⅱ/Ⅰ值和Beclin-1值均明显高于对照组和外泌体+高糖组(均P<0.05),高糖组细胞中p62值明显低于对照组和外泌体+高糖组(均P<0.01),外泌体+高糖组VEGF的质量浓度较高糖组明显降低(P<0.01).结论:高糖环境激活ARPE-19细胞自噬,并促进其VEGF的表达.hUMSC外泌体可有效抑制高糖环境下ARPE-19细胞自噬水平,并下调VEGF的表达.

摘要： 老年黄斑变性是一种随年龄增加而发病率上升导致中心视力下降的疾病.作者运用中医中药治疗本病13例22眼取得了较好效果,予以总结报道.

摘要： 老年黄斑变性是一种随年龄增加而发病率上升导致中心视力下降的疾病.作者运用中医中药治疗本病13例22眼取得了较好效果,予以总结报道.

摘要： 老年黄斑变性是一种随年龄增加而发病率上升导致中心视力下降的疾病.作者运用中医中药治疗本病13例22眼取得了较好效果,予以总结报道.

摘要： 老年黄斑变性是一种随年龄增加而发病率上升导致中心视力下降的疾病.作者运用中医中药治疗本病13例22眼取得了较好效果,予以总结报道.

摘要： 本发明涉及一种用于在体外获得人类视网膜祖细胞的方法，该方法包括以下步骤：(i)将人类多能干细胞的贴壁培养物放置于促神经培养基中；以及，(ii)使所述培养物保持在所述促神经培养基中，直至出现色素细胞和/或神经上皮样结构。有利地，可进行额外的步骤，以获得RPE细胞和/或神经视网膜前体。

摘要： 本发明涉及一种用于获得人视网膜祖细胞的体外方法，包括以下步骤：(i)将人多能干细胞的贴壁培养物置于干细胞特异性促神经培养基中，所述培养物不含饲养细胞；和(ii)在所述干细胞特异性促神经培养基中维持所述培养物，直至出现色素细胞和/或神经上皮样结构。有利地，可以进行另外的步骤以获得RPE细胞和/或神经视网膜的前体。

摘要： 本发明涉及一种用于在体外获得人类视网膜祖细胞的方法，该方法包括以下步骤：(i)将人类多能干细胞的贴壁培养物放置于促神经培养基中；以及，(ii)使所述培养物保持在所述促神经培养基中，直至出现色素细胞和/或神经上皮样结构。有利地，可进行额外的步骤，以获得RPE细胞和/或神经视网膜前体。

摘要： 本发明的复合体为包含神经视网膜、视网膜色素上皮细胞片和水凝胶的复合体，神经视网膜和视网膜色素上皮细胞片分别来源于人多能干细胞，神经视网膜中形成有至少包含视细胞层的神经视网膜层，视细胞层至少包含选自由视细胞、视细胞前体细胞及视网膜前体细胞组成的组中的1种以上的细胞，水凝胶的熔点为20°C～40°C，神经视网膜和视网膜色素上皮细胞片的整体包埋于水凝胶中，神经视网膜和视网膜色素上皮细胞片各自的表面的切线方向大致平行，神经视网膜的顶端面与视网膜色素上皮细胞片的顶端面相对，二者被水凝胶隔离而不接触。

摘要： 本发明涉及一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法及其在治疗视网膜退行性疾病中的应用，该方法为向人羊膜上皮细胞中添加含有10‑100mM烟酰胺和1‑10μM曲古抑菌素A的诱导组合物，诱导产生的细胞高表达MITF、PMEL17、RPE65、Bestrophin等视网膜色素上皮细胞的典型基因。将利用该方法诱导产生的细胞注射到RCS大鼠视网膜下腔，通过ERG以及眼底检测发现大鼠眼睛电生理信号明显增强，眼底结构明显改善，眼球切片HE染色显示其视网膜厚度明显增加，经过上述方案诱导分化后的细胞经注射后对大鼠的视力有一定程度的恢复。本发明中的诱导复合物能够用于人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞的分化以及治疗视网膜损伤相关的眼部疾病。

摘要： 本发明涉及一种视网膜色素上皮细胞上皮－间充质转换模型及其应用。将ARPE‑19细胞用胰酶消化后，再转入无血清含N2和非必需氨基酸的DMEM‑F12培养基中，并在陪替氏培养皿中培养，即得视网膜色素上皮细胞上皮－间充质转换模型；该模型用于研究视网膜色素上皮细胞发生上皮－间充质转换的分子机制及寻找上皮－间充质转换的干预靶向。与现有技术相比，本发明方法简单易行、重复性好。

摘要： 本发明公开了视网膜色素上皮细胞与间充质干细胞在制备治疗视网膜退行性疾病的药物中的应用。胎儿来源的视网膜色素上皮细胞与间充质干细胞在制备治疗视网膜退行性疾病的药物中的应用。所述的视网膜退行性疾病优选老年性黄斑变性。本发明将胎儿来源的视网膜色素上皮细胞与间充质干细胞共同移植治疗视网膜退行性疾病模型小鼠，比单纯的fRPE和单纯的MSC移植治疗，对视网膜损伤后修复功能效果更好。并且，共同移植比单纯一种细胞的移植，移植后存活的细胞数更多，光感受器细胞解救效果更强。并且，共同移植显著抑制了退行性疾病模型小鼠的炎症反应，并促进内源性生长因子的分泌。

摘要： 本发明的复合体为包含神经视网膜、视网膜色素上皮细胞片和水凝胶的复合体，神经视网膜和视网膜色素上皮细胞片分别来源于人多能干细胞，神经视网膜中形成有至少包含视细胞层的神经视网膜层，视细胞层至少包含选自由视细胞、视细胞前体细胞及视网膜前体细胞组成的组中的1种以上的细胞，水凝胶的熔点为20°C～40°C，神经视网膜和视网膜色素上皮细胞片的整体包埋于水凝胶中，神经视网膜和视网膜色素上皮细胞片各自的表面的切线方向大致平行，神经视网膜的顶端面与视网膜色素上皮细胞片的顶端面相对，二者被水凝胶隔离而不接触。

摘要： 本发明涉及一种诱导人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法及其在治疗视网膜退行性疾病中的应用，该方法为向人羊膜上皮细胞中添加含有10‑100mM烟酰胺和1‑10μM曲古抑菌素A的诱导组合物，诱导产生的细胞高表达MITF、PMEL17、RPE65、Bestrophin等视网膜色素上皮细胞的典型基因。将利用该方法诱导产生的细胞注射到RCS大鼠视网膜下腔，通过ERG以及眼底检测发现大鼠眼睛电生理信号明显增强，眼底结构明显改善，眼球切片HE染色显示其视网膜厚度明显增加，经过上述方案诱导分化后的细胞经注射后对大鼠的视力有一定程度的恢复。本发明中的诱导复合物能够用于人羊膜上皮细胞向视网膜色素上皮细胞的分化以及治疗视网膜损伤相关的眼部疾病。

摘要： 本发明涉及一种视网膜色素上皮细胞上皮－间充质转换模型及其应用。将ARPE-19细胞用胰酶消化后，再转入无血清含N2和非必需氨基酸的DMEM-F12培养基中，并在陪替氏培养皿中培养，即得视网膜色素上皮细胞上皮－间充质转换模型；该模型用于研究视网膜色素上皮细胞发生上皮－间充质转换的分子机制及寻找上皮－间充质转换的干预靶向。与现有技术相比，本发明方法简单易行、重复性好。