腺相关病毒2-ND4基因转染细胞线粒体的研究

摘要

背景Leber遗传性视神经病变（LHON）是导致视神经退行性变的线粒体遗传性疾病，主要与线粒体11778位点突变导致ND4蛋白合成异常有关，构建含正常ND4蛋白的载体是基因治疗的关键。由于ND4DNA存在于线粒体，而转染的外源基因只能进入细胞核，不能作用于突变的线粒体DNA。探讨将ND4基因成功转染到线粒体是LHON的基因治疗的关键。目的验证人工合成的ND4基因所构建的重组腺相关病毒（AAV）转染细胞后产生的ND4蛋白能否进入线粒体。方法常规体外培养转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系（293细胞），将细胞分为AAV—ND4转染组和单纯AAV转染组，分别将两种转染液加至各组的培养基中，分别于转染后12、24、36和48h用Y03量子点免疫荧光法检测细胞质中ND4的表达，细胞质中绿色荧光为ND4表达阳性。结果培养的293细胞生长良好，达到80％融合。荧光显微镜下显示，AAV-ND4基因转染组293细胞质中可见大量绿色荧光，而单纯AAV转染组仅可见线粒体蛋白红色荧光。结论AAV-ND4基因转染细胞后产生的ND4蛋白能够进入线粒体，为LHON的基因治疗提供了实验依据。