VEGF165基因重组腺相关病毒构建及转染猪骨髓间充质干细胞的研究

摘要

目的 构建携带人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)的重组腺相关病毒载体,在体外转染猪骨髓间充质干细胞并观察其表达.方法 细胞AAV包装质粒pAAV-IRES-ZsGreen及含hVEGF的质粒经EcoR Ⅰ +BamH Ⅰ双酶切、连接,构建pAAV-hVEGF165-IRES-ZsGreen载体,采用磷酸钙法转染293AAV细胞系,获得rAAV2-hVEGF165及对照重组腺相关病毒,real-time PCR法测定病毒效价.Western blot检测重组rAAV2-hVEGF165在猪骨髓间充质干细胞的表达,MTS法检测VEGF蛋白活性.结果 成功构建rAAV2-hVEGF165重组腺相关病毒载体,rAAV2-hVEGF165经双酶切和测序鉴定正确,real-time PCR法测定病毒效价为5×1012vg/ml.转染rAAV2-hVEGF165的猪骨髓干细胞能够有效表达VEGF蛋白,并能促进血管内皮细胞的增殖.结论 成功构建rAAV2-hVEGF165重组腺相关病毒载体,并能在猪骨髓间充质干细胞中有效转染和表达,为进一步探索rAAV2-hVEGF165对治疗缺血性心肌疾病的研究提供实验基础.