复制缺损型HBV表达显性阴性突变体抗HBV作用的研究

摘要

目的探索HBV作为基因治疗载体的可能性及检验HBV点突变表达显性阴性突变体抗HBV的作用.方法在表达完整HBV颗粒的质粒上,经基因修饰后分别表达核心-P蛋白及核心-表面抗原的融合蛋白,整合于具有HBV复制的2.2.15细胞,形成细胞克隆,ELISA法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg,斑点杂交法检测细胞内HBV核壳中HBV DNA,PCR检测上清液中重组HBV颗粒.结果2.2.15-pMEP4组、2.2.15-CP组、2.2.15-CS组,对HBsAg平均抑制率分别为2.74%±3.83%、40.08%±2.05%(P＜0.01)和52.94%±1.93%(P＜0.01);对HBeAg平均抑制率分别为4.46%±4.25%、52.86%±1.32%(P＜0.01)和41.60%±1.65%(P＜0.01);对HBV复制的抑制率分别为15.3%、82.0%和67.2%.仅在2.2.15-CP组培养上清液中能检测出突变型HBV颗粒.结论在细胞内表达显性阴性突变体具有干扰HBV复制及抑制HBV抗原表达的作用;经修饰后的HBV基因组在野生型HBV辅助下,仍能包装并分泌完整的HBV样颗粒.