骨保护素、核因子-κB受体活化因子配基在氟砷联合染毒大鼠骨骼毒性中的调控作用

摘要

目的 探讨骨保护素（OPG）与核因子-κB受体活化因子配基（RANKL）在氟砷联合染毒大鼠骨骼毒性中的调控作用。 方法 选取192只8周龄清洁级Wistar大鼠，体重为（200 ± 50）g，根据2 × 4析因实验设计按体重采用随机数字表法分成16组， 每组12只，雌雄各半。用氟化钠（NaF，空白对照0.0 mg／kg、低氟5.0 mg／kg、中氟10.0 mg／kg、高氟20.0 mg／kg）和亚砷酸 钠（NaAsO2，空白对照0.0 mg／kg、低砷2.5 mg／kg、中砷5.0 mg／kg、高砷10.0 mg／kg）灌胃染毒6个月。依据上述处理因素将 大鼠分为对照组（F0As0）、低氟组（F5.0As0）、中氟组（F10.0As0）、高氟组（F20.0As0）、低砷组（F0As2.5）、中砷组 （F0As5.0）、高砷组（F0As10.0）、低氟低砷组（F5.0As2.5）、低氟中砷组（F5.0As5.0）、低氟高砷组（F5.0As10.0）、中氟 低砷组（F10.0As2.5）、中氟中砷组（F10.0As5.0）、中氟高砷组（F10.0As10.0）、高氟低砷组（F20.0As2.5）、高氟中砷组 （F20.0As5.0）、高氟高砷组（F20.0As10.0）。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA法）检测大鼠骨组织中OPG及RANKL蛋白表达水平 ，实时荧光定量PCR法检测OPG及RANKL mRNA表达水平。结果 与F0As0组［（2.678 ± 0.136）ng／mg、（29.658 ± 0.662）pg／ mg］比较，F5.0As0、F10.0As0、F20.0As0组骨组织中OPG［（2.857 ± 0.162）、（2.983 ± 0.272）、（3.117 ± 0.143）ng／ mg］、RANKL［（32.533 ± 0.999）、（32.698 ± 1.932）、（33.331 ± 1.140）pg／mg］蛋白表达水平随染氟剂量的升高均有 升高趋势；与F0As0组比较，F0As2.5、F0As5.0、F0As10.0组骨组织RANKL蛋白水平［（32.348 ± 2.838）、（31.589 ± 1.359） 、（28.843 ± 1.908）pg／mg］随染砷剂量的升高而先升高后下降（P均 〈 0.05）。与F0As0组（0.83 ± 0.19、0.92 ± 0.23） 比较，F5.0As0、F10.0As0、F20.0As0组骨组织OPG（1.14 ± 0.27、1.33 ± 0.39、1.69 ± 0.77）、RANKL mRNA水平（1.02 ± 0.21、1.17 ± 0.15、1.25 ± 0.31）随染氟剂量的升高均有升高趋势。氟对OPG、RANKL蛋白和mRNA的表达有主效应（F = 11.530 、21.765、6.320、3.543，P均 〈 0.05），氟砷联合对RANKL蛋白和mRNA、OPG蛋白表达存在交互拮抗作用（F = 9.496、2.217、 3.375，P均 〈 0.05）。结论 氟砷联合染毒对大鼠骨组织RANKL及OPG的影响中氟起主导作用，砷间接参与了氟致大鼠骨骼毒性作用 ，氟砷联合对OPG及RANKL表达的交互作用主要表现为拮抗作用。