黑曲霉原生质体电融合研究

摘要

以NTG和UV分别对生淀粉糖化酶菌株——野生型黑曲霉N-11,N-16(Aspergillus niger)进行诱变处理获Lys^-和Arg^-两类营养缺陷型。采用纤维素酶和蜗牛酶复合酶处理其菌丝并探讨了酶浓及菌龄等因素对原生质体形成和再生的影响。以BAEKON-2000型基因转移仪将上述营养缺陷型进行原生质体电融合处理。产生高融合率的最佳参数为:脉冲幅度4.5kV,脉冲数32,脉宽62.5μs,电激时间0.2s,距离3mm,周期数10。融合率可达60%。经连续传代7次获得4株稳定的融合子,经孢子体积,核DNA含量,生长速度测定证明上述融合子是种内杂合二倍体。以PFA处理得稳定的单倍体分离子。