金黄色葡萄球菌重组GapC蛋白的GAPDH活性及免疫原性分析

摘要

为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)表面GapC蛋白的GAPDH活性、免疫原性及免疫保护作用, 应用PCR方法扩增出S. Aureus的gapC基因, 插入到pQE-30载体相应位点, 构建重组质粒pQE/gapC.将其导入宿主菌E.coli M15(pREP4)后, IPTG诱导表达.重组蛋白纯化后进行GAPDH活性检测, 并与灭活全菌体分别免疫健康家兔.然后, 应用ELISA方法检测血清中IgG抗体水平及IFN-γ、IL-4细胞因子浓度, 并用1.0×108CFU/mL S. Aureus菌株Wood46对免疫家兔攻毒.SDS-PAGE结果显示, GapC蛋白在E. Coli M15(pREP4)中获得表达; 经GAPDH活性检测及Western Blot检测, 重组蛋白具有较高的GAPDH活性和抗原特异性; 经ELISA检测, GapC蛋白及全菌体组兔血清中IgG抗体水平迅速升高, 并在加强免疫后第28天达到最高(1:64 000), 加强免疫后第14 d, 血清中细胞因子IFN-γ和IL-4浓度与对照组相比, 显著升高(P<0.05), 而全菌体免疫组升高不明显(P>0.05); 攻毒结果为蛋白免疫组家兔获得一定的免疫保护(4/5).以上结果表明, 表达的重组GapC蛋白具有GAPDH活性、较好的免疫原性及免疫保护力, 可作为深入研究S. Aureus基因工程疫苗的良好靶向.