bla_(TEM-116)型超广谱β-内酰胺酶的表达、纯化及其应用

摘要

为大量获取低成本的TEM-116超广谱β-内酰胺酶,并分析其降解环境中β-内酰胺类抗生素残留物的可行性,本研究在Escherichia coli BL21(DE3)菌株中表达了重组TEM-116超广谱β-内酰胺酶,经亲和层析纯化、柱复性与分子筛层析纯化,得到了高纯度的目的蛋白,对其理化性质进行了分析.结果表明,重组TEM-116超广谱β-内酰胺酶的分子量、比活性分别为30 kDa和476 IU/mg,与天然酶性质相近.重组酶在体内外对多种青霉素、头孢菌素类药物均具有较高降解效率:10 IU酶可清除1 L发酵液中7000 mg的青霉素G;320 IU酶可清除1 L尿液中各200 mg的青霉素G、氨苄青霉素和头孢唑林混合抗生素;1.0～2.5 IU的酶可在4℃～37℃温度范围内清除1 L牛奶中80 U的青霉素G;2.0×10~4～2.3×10~4IU/(kg·bw)的酶能够清除小鼠体内8.0×10~4～9.1x10~4 μg/(kg·bw)的青霉素G.