TEM-116和SHV-4超广谱β-内酰胺酶的表达、纯化及其药效学研究

摘要

本研究应用DNA重组技术将blaTEM-116基因克隆入pET28a质粒和pET26b质粒表达，将blaTEM-116删除信号肽序列(blaMTEM-116)克隆入pET28a质粒表达，从天然高产酶菌中获取ESBLs基因，测序证实为blaSHV-4基因，把该基因克隆入pET28a质粒和pET26b质粒表达，分析blaTEM-116基因和blaSHV-4基因序列并和其它ESBLs的序列比较，绘制分子进化树，并从产酶菌中挑选产酶量最高的pET28-TEM-116/BL21(DE3)作为工程菌，摇瓶发酵、纯化该菌产的TEM-116酶，进一步发酵罐发酵、大量纯化该酶，最后分别在牛奶中和小鼠体内验证TEM-116酶的药效学作用。

目录

论文说明：英文缩写词表

引言

实验一b1aTEM-116基因序列分析及其删除信号肽序列片段在pET28a/BL21系统中的表达

摘要

前言

1.材料与方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

实验二b1aTEM-116基因型超广谱β-内酰胺酶的表达、复性及纯化

摘要

前言

1.材料与方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

实验三TEM-116超广谱β内酰胺酶的发酵和纯化

摘要

前言

1.材料与方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

实验四TEM-116酶清除体外、体内青霉素G药效学实验

(一)TEM-116酶清除牛奶中青霉素G药效学实验

摘要

前言

1.材料与方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

(二)TEM-116酶清除小鼠体内青霉素G药效学实验

摘要

前言

1.材料与方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

实验五b1aSHV-4基因的克隆和序列分析及其在不同表达系统中的表达和纯化

(一)b1aSHV-4基因克隆和序列分析及其在pET28a/BL21系统中的表达和纯化

摘要

前言

1.材料与方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

(二)b1aSHV-4基因在pET26b/BL21表达系统中的表达和纯化

摘要

前言

1.材料与方法

2.结果

3.分析与讨论

4.小结

附图

结论

参考文献

附录

致谢

文献综述超广谱β-内酰胺酶的研究进展