一种重组超广谱β-内酰胺酶的表达纯化及其高密度发酵方法

摘要

本发明公开了重组超广谱β-内酰胺酶的表达纯化及其高密度发酵方法。涉及含SHV-4型ESBL基因插入分泌型表达载体，并在大肠杆菌中表达。还涉及中试级别的发酵和纯化，发酵获取大量细菌后，菌体悬液超声破碎、离心获取超声上清及其包涵体沉淀：超声上清通过亲和层析，一步就获取高纯度重组SHV-4型ESBL，平均每升发酵液中得到7mg，酶比活为476IU/mg；而包涵体沉淀的复性和纯化同时进行，沉淀溶于尿素后，采用分子筛层析法纯化，获取高纯度重组SHV-4型ESBL，并在纯化的同时使重组ESBL复性，得到每升发酵液中得到17mg SHV-4型ESBL，酶比活为438IU/mg。本发明为各型ESBL生产制备提供一种方法，为大量制备ESBL打下坚实的基础。