转化生长因子-β1诱导新生大鼠肺成纤维细胞增殖的细胞周期调控研究

摘要

目的探讨转化生长因子（TGF）-β1刺激下细胞周期调控对肺成纤维细胞增殖的影响，了解支气管肺发育不良（BPD）的发病机制。方法对出生1 d新生大鼠的肺成纤维细胞进行分离、纯化和鉴定，将原代肺成纤维细胞经TGF-β1刺激后，应用免疫组织化学及Western blot技术检测周期蛋白依赖性激酶-2（CDK2）及p27的蛋白表达情况，实时荧光定量PCR检测CDK2及p27的mRNA表达，并同时应用CCK8试剂盒检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果对鉴定后的新生大鼠肺成纤维细胞进行TGF-β1刺激后，可以观察到原代成纤维细胞的CDK2蛋白及mRNA表达增加，并伴p27蛋白及mRNA水平下降；CCK8显示吸光度值增高，增殖明显，S期细胞所占比例同时增加，G0/G1期逐渐减少。0、10 μg/L的TGF-β1刺激后S期细胞所占比例分别为4.63%、67.09%，G0/G1期为83.67%和67.09%。10 μg/L的TGF-β1刺激12 h和48 h后S期细胞所占比例分别为7.64%、9.11%，G0/G1期为73.99%和59.81%。随着TGF-β1水平增加（0 μg/L、5 μg/L及10 μg/L），CDK2蛋白及mRNA表达进一步增加；并且相同水平TGF-β1刺激，随着时间的延长（10 μg/L的TGF-β1刺激12、24、48 h），CDK2蛋白及mRNA表达进一步增加，48 h较对照组增加显著（P〈0.05和〈0.01），p27蛋白及mRNA水平随之进一步下降，48 h较对照组增加显著（均P〈0.01）。结论TGF-β1能够使新生大鼠肺原代成纤维细胞CDK2/p27表达失衡，加速细胞周期进程，使成纤维细胞过度增殖。