牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因在卡介苗中的优化表达

摘要

为构建牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)基因工程活载体疫苗,根据已知的BVDV Changchun184毒株E2基因序列,利用DNAStar生物学软件对其进行分析,预测了可能存在的抗原表位,设计6对引物,分别扩增了包含预测抗原位点的6个片段,1-297 aa、1-345 aa、1 374 aa、45-297 aa、45-345 aa和45-374 aa,克隆至穿梭表达载体pMV361中,经酶切、PCR扩增和测序证实已正确插入到表达载体中,构建了6个原核表达质粒.阳性重组质粒通过电转化到卡介苗(BCG)感受态中,热诱导后,进行SDS-PAGE分析和免疫印迹检测.结果表明6个重组质粒在卡介苗中均有不同程度的表达,表达产物与理论推测的相对分子质量一致.Western blot结果显示其融合蛋白能被牛抗BVDV的阳性血清识别,具有相应的反应原性.本研究为进一步研究BVDV基因工程活载体疫苗奠定了基础.