牛病毒性腹泻病毒E2基因在昆虫细胞上的表达

摘要

为了获得具有良好抗原性的牛病毒性腹泻病毒囊膜蛋白,本研究利用PCR方法扩牛病毒性腹泻病毒E2基因,连接于昆虫杆状病毒表达载体中,构建pFastBacHTA-E2重组质粒。将该重组质粒转化入DH10BAC感受态细胞,经抗生素、PCR鉴定,获得转座杆粒Bacmid-E2.转座杆粒Bacmid-E2转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,感染细胞后,收获得到目的蛋白,最后用SDS-PAGE和Western blotting对重组的表达蛋白进行分析。结果表明,实验成功体外表达E2基因,重组E2蛋白大小为43.6kDa,与预期值相符,且该蛋白能与BVDV阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性。此研究结果为进一步研发牛病毒性腹泻病毒ELISA检测试剂盒奠定物质基础。