山羊先天免疫基因BCL10克隆、组织表达及真核载体构建分析

摘要

本研究旨在探索作为先天免疫相关分子的BCL10蛋白对山羊的免疫调控.实验采用RT-PCR、3'RACE和5'RACE克隆方法,以NCBI中山羊BCL 10预测基因序列为模板,克隆初生羔羊脾脏组织BCL10基因cDNA序列,并进行生物信息学分析;采用qRT-PCR技术检测羔羊BCL10基因各免疫相关组织转录表达谱;鉴定pEGFP-N1-BCL10重组质粒在细胞的真核表达效果.结果表明:克隆得到BCL10基因cDNA全长1023 bp,其中CDS为693 bp,编码230个氨基酸;生物信息学分析结果发现山羊BCL10蛋白是一种N端存在CARD结构域、非分泌、非膜结合的胞内蛋白,氨基酸序列与水牛、绵羊的亲缘关系最为接近;颌下腺中BCL10基因表达量显著高于肺脏、肝脏、脾脏、肾脏及血液(P＜0.05),胸腺中BCL10基因表达量显著高于血液(P＜0.05),血液表达最少;成功构建了BCL10基因完整CDS序列的pEGFP-N1-BCL10重组载体,并在HEK293T真核细胞正常表达.本研究首次克隆出羊BCL10基因cDNA全长序列,检测了基因表达分布情况,构建了重组载体,为进一步探索山羊BCL10基因功能及蛋白免疫机制提供理论基础.