T细胞和NK细胞产生,除具有抗病毒和抗肿瘤活性外,免疫调节作用是其主要的生物学功能,如:激活巨噬细胞、上调MHCI、Ⅱ类分子表达水平和促进抗原提呈,诱导Th细胞的分化等,在机体针对肿瘤及多种胞内病原体感染等疾病的细胞免疫中发挥重要的作用,是体现机体免疫功能的一项重要指标。 大熊猫(Ailuropoda melanoleu'/>
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声明
1文献综述
1.1干扰素的发现
1.2干扰素产生
1.3干扰素诱导原
1.4干扰素的作用机理
1.5干扰素基因工程学研究
1.6IFN-γ生物学活性及应用
2材料与方法
2.1试验材料
2.1.1试验动物
2.1.2主要试剂
2.1.3菌株和质粒
2.1.4常用缓冲溶液和培养基的配制
2.1.5主要仪器设备
2.1.6主要生物信息数据库和计算机软件
2.2试验方法
2.2.1大熊猫外周血淋巴细胞诱导培养
2.2.2总RNA提取
2.2.3引物设计
2.2.4第一链cDNA的合成
2.2.5 PCR扩增
2.2.6 PCR产物的回收
2.2.7 cDNA片段克隆及鉴定
2.2.8序列测定与分析
2.2.9克隆序列的GenBank登录
2.2.10原核表达载体的构建
2.2.11重组pET32aIFN-γ质粒在大肠杆菌中的诱导表达
2.2.12IFN-γ基因重组真核表达载体的构建
3试验结果
3.1 IFN-γ基因的克隆与序列分析
3.1.1总RNA提取
3.1.2 RT-PCR
3.1.3基因克隆
3.1.4重组pGEMTIFN-γ质粒的酶切鉴定
3.1.5重组pGEMTIFN-γ质粒的测序鉴定
3.1.6序列分析
3.2 IFN-γ基因原核表达载体构建及表达
3.2.1重组YpGEMTIFN-γ质粒的酶切
3.2.2重组pET32aIFN-γ质粒的酶切鉴定
3.2.3重组pET32aIFN-γ质粒的测序鉴定
3.2.4 IPTG诱导重组表达菌的转录检测
3.2.5表达融合蛋白的SDS-PAGE电泳检测
3.3 IFN-γ基因真核表达载体构建
3.3.1重组ZpGEMTIFN-γ质粒的酶切
3.3.2重组pcDNA3.1(+)IFN-γ质粒的酶切鉴定
3.3.3重组pcDNA3.1(+)IFN-γ质粒的测序鉴定
4讨论
5结论
参考文献
致谢
附录
攻读硕士学位期间发表论文