伪狂犬病病毒IE180基因启动子缺失克隆的构建与鉴定

摘要

在本实验室已有的PRV JS-2012感染性克隆pBAC-JS2012及突变筛选菌株SW102-PRVBAC基础上,利用galk正筛选和卡那霉素的筛选标记基因,构建IE180两个拷贝启动子均删除的缺失克隆.利用同源重组将galk表达盒替换掉IE 180TATA-box及左边297个碱基和右边172个碱基,经PCR鉴定和筛选获得阳性克隆SW 102-galk.通过Western blot分析,IE180仍然存在表达.在此基础上再利用相同的方法将Kna筛选标记基因替换掉另一个拷贝IE180TATA-box及其左边134个碱基和右边309个碱基,经过PCR鉴定、Western blot分析以及转染后绿色荧光表达的分析,证实IE180不再表达.本研究成功筛选到IE180启动子缺失的阳性克隆pPRV-DIE 180-BAC,为后期IE180缺失互补系统的构建及更深入的探究IE180的生物学功能奠定基础.