伪狂犬病病毒PK基因的克隆与PK、gG双缺失转移载体的构建

摘要

地高辛标记伪狂犬病病毒(PRV)E a株短区段蛋白激酶(PK)基因3′端0.4 kb片段,Sou thern杂交确定短区段PK基因定位在基因组DNA B amHⅠ4.0 kb片段中。将该片段克隆获得重组质粒pSB 304,对pSB 304亚克隆,构建了仅含完整PK基因约1.3 kb片段的重组质粒pSB 305,并进行了序列测定。结果表明,PK基因存在2种可能的同框编码方式,分别编码388或334个氨基酸残基,并具有真核细胞蛋白激酶催化结构域序列。同国外PRV N IA-3、K a株相比,氨基酸同源性分别为98.8%和97.3%,有意义的是E a株、K a株均较N IA-3株在同一位置缺失2个氨基酸(A sp,G ly)。进一步对pSB 305和含gG全基因以及部分gD基因的质粒pU SK进行酶切拼接,将PK基因大部分编码区、gG基因5′端部分编码区进行缺失,构建成两端同源侧翼分别为3.1 kb和1.6 kb的PK、gG双缺失转移载体pLR 001。上述结果为深入研究PK基因功能及研制更安全的TK-/PK-/gG-三缺失基因工程疫苗奠定了基础。