猪伪狂犬病毒gG基因缺失转移载体的构建

摘要

根据GenBank中已发表的PRV gG基因序列,设计并合成了一对特异性引物,从PRV-FA病毒株基因组中扩增出包含PRV gG全基因、部分pK基因、部分g,D基因的一段序列,长度为3.1kb.将得到的3.1kb片段的DNA质粒用SphI和Kpnl消化酶切后,亚克隆到载体pUC19中,获得重组质粒PUP.以pcDNA3.1(+)载体为模板,设计引物,经PCR扩增得到约0.3kb的SV40 Poly(A)片段,经BamHI和PstI酶切后,将其克隆到重组质粒PUP上,构建重组质粒PUPS.将重组质粒PUPS上的HinⅢ酶切位点进行消除,得到改造完成的PUPS.将pEGFP-nl载体进行改造,消除掉其上的BamHI和PstI酶切位点.根据改造过的pEGFP-nl载体基因序列设计一对引物,通过PCR扩增技术得到目的基因EGFP(包括GFP、CMV、MCS、SV40 Poly(A)),将目的基因克隆入pMD18-T载体内.将改造后的PUPS用PstI酶切后,再进行去磷酸化,与同样经PstI酶切处理的EGFP进行连接,通过PCR扩增、酶切、序列测定,证实该转移载体构建成功,并将其命名为PG.