促肝细胞生长素联合不同 DMSO 浓度冻存小鼠肝细胞的质量研究

摘要

目的：使用自行配制组方含有促肝细胞生长素联合不同浓度 DMSO 的冻存液冻存小鼠肝细胞，以探索一种效果较好的冻存液从而改善冻存肝细胞质量。方法以体重20～30 g 的昆明小鼠为肝细胞供体，用改良的胶原酶灌注法分离肝细胞，将分离好的肝细胞分别以10％、20％、30％浓度的 DMSO 联合促肝细胞生长素的冻存液（试验组1、2、3组）和标准冻存液（对照组）进行逐级降温缓慢冻存，置液氮中。2个月后快速复苏肝细胞，观察并测定肝细胞活率、功能和形态学。结果冻存小鼠肝细胞2个月复苏检测，试验1组、2组、3组的肝细胞活率台盼蓝（TB）染色结果为80．18±2．44％、86．20±2．33％、78．50±3．43％，而对照组肝细胞活率 TB 染色49．71±3．51％，试验组和对照组差异具有统计学意义（P ＜0．05），试验2组与其他试验组比较差异具有统计学意义（P ＜0．05）；血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和乳酸脱氢酶（LDH）漏出率的值，试验1组、2组、3组分别为14．03±2．21 U／L、8．05±1．25 U／L、18．40±3．25 U／L；15．14±3．03 U／L、9．12±1．56 U／L、20．51±3．56 U／L；15．11±2．10 U／L、8．26±1．23 U／L、20．31±3．21 U／L，而对照组分别为24．28±1．96 U／L、25．44±2．06 U／L、26．22±3．23 U／L，两组差异具有统计学意义（P ＜0．05），试验2组与其他试验组比较差异具有统计学意义（P ＜0．05）；合成血清白蛋白的值，试验1组、2组、3组为3．24±0．18 g／L、4．12±0．23 g／L、3．01±0．45 g／L，对照组为2．56±0．32 g／L，两组差异具有统计学意义（P ＜0．05），试验2组与其他组比较差异具有统计学意义（P ＜0．05）。结论在本研究中，冻存小鼠肝细胞2个月，促肝细胞生长素联合20％DMSO 冻存液较常规冻存液能有效减轻小鼠肝细胞的损伤，发挥良好保护作用。