苦参碱联合DMSO大规模冻存人胎肝细胞的实验研究

摘要

目的 观察苦参碱对大规模低温冻存人胎肝细胞功能的影响.方法 改良肝细胞获取方法分离人胎肝细胞,经过1 h预培养后.将5种不同浓度(1×107,2.5×107,5×107,7.5×107,10×107·mL-1)的胎肝细胞以6 mg/L苦参碱+5%DMSO为冻存保护液置于骨髓干细胞冻存袋在液氮中冷冻保存1个月.1个月后复苏,进行活率、形态学及功能检测.结果 5种不同浓度的细胞冻存1个月后,细胞浓度为2.5×107·mL-1组复苏后存活率与其余四组相比差异有显著性(P<0.05),且明显高于其余四组.复苏后细胞存活率和24 h贴壁率分别为73%,69%,经过短期培养后,细胞功能逐渐恢复.结论 (1)苦参碱对低温冻存的人胎肝细胞有保护作用,与二甲基亚砜联用可降低DMSO的浓度;(2)以5%DMSO+6 mg/L苦参碱作为冻存保护刑,细胞浓度在2.5×107·mL-1冻存效果最佳.该大规模冻存方法基本上可以满足生物人工肝肝细胞应用的需求.