微小RNA-144上调Rb抑制骨肉瘤细胞增殖及诱导凋亡

摘要

目的 探讨微小RNA-144(miR-144)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及相关蛋白影响.方法 运用脂质体转染的方法,在骨肉瘤细胞株MG-63中转染不同浓度miR-144类似物(miR-144组),随机miR-144片段作为阴性对照组.实时定量PCR检测miR-144表达水平.DAPI染色观察miR-144对细胞形态的影响,用MTT检测细胞增殖,Annexin/PI双染确定细胞凋亡比例.免疫印迹检测PTEN以及Rb等抑癌基因编码蛋白和凋亡相关蛋白表达情况.结果 实时定量PCR结果显示,miR-144组miR-144的表达(1128.54±738.52)明显高于空白对照组(1.00±0.00)和阴性对照组(2.06±0.73)(P＜0.01).与阴性对照组和空白对照组比较,miR-144组细胞数量明显减少,增殖受抑制,流式细胞检测显示,细胞凋亡率明显增加.免疫印迹检测显示,Rb和PTEN表达水平有所增加,而凋亡相关的Caspase-3活化,线粒体膜上Cyto C释放.而阴性对照组与空白对照组以上数值比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 合成的miR-144片段(miR-144mimic)能顺利进入细胞并上调miR-144的表达,对骨肉瘤细胞都有一定程度的抑制作用,并有浓度依赖性,对MG-63的抑制效果最强,并通过活化Caspase-3促进凋亡,上调PTEN和Rb的表达实现对细胞的抑制作用.未来可以基于miR-144进行骨肉瘤治疗的短核苷酸类药物开发.