miR-424负调控PAK2基因抑制骨肉瘤细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

摘要

cqvip:目的研究miR-424在骨肉瘤细胞中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法采用RT-PCR法和Western blot法检测骨肉瘤细胞和健康人成骨细胞中miR-424、PAK2 mRNA及PAK2蛋白的表达情况。采用Lipofectamine2000在骨肉瘤U2-OS细胞中转染miR-424或si-PAK2,采用Western blot法检测转染后骨肉瘤U2-OS细胞中相关蛋白的表达,CKK-8法检测细胞的活性,流式细胞术检测细胞的凋亡。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-424对PAK2的靶向作用。采用Lipofectamine2000在骨肉瘤U2-OS细胞中共转染miR-424和pcDNA-PAK2,利用上述方法检测骨肉瘤U2-OS细胞增殖和凋亡、相关蛋白表达。结果与健康人成骨细胞hFOB1.19相比,骨肉瘤MG63、U2-OS、SOSP-9607细胞中miR-424的表达显著下调,PAK2 mRNA和蛋白的表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-424抑制骨肉瘤U2-OS细胞增殖并促进细胞凋亡,减少Cyclin D1和Bcl-2的表达量,增加Bax的表达量,差异均有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-424对PAK2具有靶向作用,miR-424可负向调控PAK2的表达;沉默PAK2抑制骨肉瘤U2-OS细胞增殖并促进细胞凋亡,降低Cyclin D1和Bcl-2的表达量,提高Bax的表达量,差异均有统计学意义(P<0.05);共转染miR-424和pcDNA-PAK2促进骨肉瘤U2-OS细胞增殖并抑制细胞凋亡,增加Cyclin D1和Bcl-2的表达量,减少Bax的表达量,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-424可通过负调控PAK2基因抑制骨肉瘤U2-OS细胞的增殖和诱导细胞凋亡。