电转化方法将外源性质粒导入干酪乳杆菌的研究

摘要

以pMG36e,pMG36c和已消除内源性质粒的干酪乳杆茵(L.case/Zhang)材料,在不同参数下进行电转化实验并建立最佳实验条件.结果表明:最佳电转化电压为1.5 kV,时间为2.0 ms.pMG36c转化不同对数生长期L.case/Zhang时,发现转化对数生长中期菌体获得的转化子数最高,而转化效率不是最高;转化生长初期获得的转化子数为4.04x106mL-1,电转化效率为89.78%;后期则为1.6x107mL-1和4.0%.磷酸纳作电击缓冲液获得的转化子数高于体积分数为10%甘油获得的转化子数.复苏培养基甘氨酸质量分数为0.5%时得到的转化子数最高,转化效率为35.56%;当甘氨酸质量分数增加到1%时得到的转化子数和转化效率分别下降到5.6x106mL-1和6.22%.甘氨酸质量分数为2%时得到的转化子数和转化效率更低;不同质粒转化L case Zhang时,pMG36c转化获得的转化子数高于pMG36e转化子数.选择pMG36e转化L.case Zhang的转化子为模板,通过PCR反应已证实转化试验的可靠性.本研究为外源基因电转化干酪乳酸菌提供了可靠的参考依据.