一株乳源蜡样芽孢杆菌肠毒素基因克隆与序列分析

摘要

为研究患有耐药性奶牛乳房炎的致病菌毒力基因,本研究对从乳房炎患牛乳中分离鉴定的一株蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)2018CQ-CMM01株肠毒素基因(Enterotoxin,Ent)进行了克隆与序列分析.采用PCR方法扩增临床分离株Ent基因片段,结果表明克隆基因全长1098bp,可编码349个氨基酸;经氨基酸序列分析,发现该蛋白质为碱性的疏水性蛋白,稳定性弱,无信号肽结构,有5个跨膜区域;二级结构预测发现,延伸链为该蛋白的主要二级结构元素.核苷酸序列的同源性分析表明,与其他几株肠毒素菌株相比,本研究中克隆的Ent基因(GeneBank登录号:MT814304)与B.cereus克隆Pnc9肠毒素FM样基因部分序列(EF453659.1)相似度最高,为96.45％;Ent基因系统进化树分析发现,本研究中Ent基因与中国菌株CP040336.1的同源性最高,与巴基斯坦B.cereus标准株CP026375.1,泰国株EF453659.1、EF453660.1等处于不同进化分支,说明该Ent基因与中国菌株CP040336.1遗传距离最近;同时在Ent基因的ORF中存在一个141bp的小ORFs编码区,结构预测发现,该编码区编码杆菌通道蛋白相关的内肽酶,可能是毒力基因调控因子.