蚕微卫星DNA的体外自我扩增条件初步研究

摘要

采用一种类似PCR的基因组自我引发PCR(GSP—PCR)法，初步研究了家蚕、野蚕、天蚕、蓖麻蚕和柞蚕的微卫星DNA的体外基因组自我引发PCR扩增的条件。结果发现。浓度为100ng/μl的基因组DNA在100℃变性15min后，与等量的同浓度的未变性的DNA混合作为模板。在80m扩增体系中[含0．2mM dNTPs、50mM KCl、10mM Tris—HCl(pH9．0)、4mM MgCl2、1．25U Tap plymerase]，加入1μl此混合模板，在92℃，1min→55℃，2min→72℃，2min，30→90次循环的扩增条件下，成功地得到了PCR产物。基因组DNA的适宜浓度为1．25ng/μl反应体系；GSP—PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后的部分片段经回收后，在同样条件下，30—60个循环可得到同样大小范围的产物。GSP—PCR产物经6％的变性测序胶电泳，得到典型的梯状带，表明为微卫星DNA。