液相色谱-串联质谱法研究重组水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的一级结构

摘要

利用液质联用研究重组水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的一级结构.采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的相对分子质量;采用液质联用分别分析HV12p-rPA的胰蛋白酶(trypsin)和胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)酶解产物.MALDI-TOF-MS测得HV12p-rPA的相对分子质量为41472Da,与理论值相符;HV12p-rPA的胰蛋白酶(trypsin)酶解产物进行液质联用分析结果表明该融合蛋白中含有瑞替普酶序列;HV12p-rPA的胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)酶解产物进行液质联用分析,结果表明融合蛋白中含有水蛭素12肽,并检测出融合蛋白中的链接肽(DEGGGSY),融合蛋白的N末端MASDF和C末端LDWIRDNMRP;采用液质联用进行肽图分析,识别出的多肽匹配度Xcorr均超过1.5,部分多肽的Xcorr超过3.0,表明本实验测定过程中多肽识别结果准确可靠;目标蛋白的氨基酸序列覆盖率超过85%.结果确定了HV12p-rPA融合蛋白的序列与理论值相符.