卷枝毛霉中苹果酸酶同工酶V的酶学性质

摘要

[目的]探讨卷枝毛霉中苹果酸酶同工酶V的性质.[方法]克隆卷枝毛霉中编码苹果酸酶同工酶V的me1基因并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,利用His标签纯化获得了高纯度的重组酶BLME1,并进行酶学性质分析.[结果]该重组酶最适pH为8.0,最适温度为33℃,在此条件下酶活达到92.8 U/mg,对底物L-苹果酸和NADP+的米氏常数Km值为0.74960±0.06129 mmol/L和0.22070± 0.01810 mmol/L,最大反应速度Vmax分别为72.820±1.077U/mg和86.110±1.665U/mg.金属离子Mg2+、Mn2+、Co2+、Ni2+可以激活BLME1的活性,而Ca2+、Cu2+对BLME1活性则有抑制作用,中间代谢产物草酰乙酸和α-酮戊二酸也会抑制BLME1的活性,但琥珀酸却对BLME1有激活作用.[结论]本实验调查了卷枝毛霉苹果酸酶同工酶V的最适反应温度和pH、动力学参数,以及各种金属离子和中间代谢产物对酶活力的影响,这为以后深入研究该苹果酸酶的功能提供了理论依据和参考.