卷枝毛霉脂肪酸脱饱和酶的克隆与表达

摘要

卷枝毛霉(Mucor circinelloides)作为一种产油脂丝状真菌,可用于多种不饱和脂肪酸的生产,具有重大的经济价值.为进一步探究卷枝毛霉的代谢途径和分子机理,本文对Mucor circinelloides EIM-10的△12-脱饱和酶和△9-脱饱和酶基因进行克隆分析和表达.结果显示,△12-脱饱和酶和△9-脱饱和酶全长分别为1191bp和1359bp,编码397和453个氨基酸.序列比对显示,与Amylomyces rouxii和Mucor circinelloides具有94％的相似性.将△12-脂肪酸脱饱和酶基因连接到酵母表达载体pYES2.0,构建重组表达载体pYMCD12,转入酿酒酵母表达,pYMD12将内源油酸(C18∶1)转化成亚油酸(C18∶2)的转化效率达36.401％.rn 为了提高表达量，本文探究了启动子MD6p和GAP对△12-脱饱和酶表达效率的影响。从毕赤酵母表达载体pGAPZα,中克隆到GAP启动子，将GAP连接到pYMD12载体中，成功构建pYGAPMD12表达载体;用△12-脱饱和酶cDNA替换pYMD6pMD6表达载体中的△6-脱饱和酶基因，成功构建pYMD6pMD12表达载体。结果表明:相对pYMD12,pYMD6pMD12转化C18:1的转化率提高了18.432%，而pYGAPMD12转化C18:1的转化率提高了32.771%。