家蚕30 kD特异性变应原的分析、纯化与质谱鉴定

摘要

以Coca's提取液分别提取到不同时期家蚕Bombyx mori的粗浸液,利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定其特异性变应原,然后用DEAE-52离子交换层析及切胶纯化出30 kD的特异性变应原,再经MALDI-TOF在线联机分析,所得质谱数据进入网站搜索分析.结果显示:1～5龄家蚕均有20条左右蛋白带,其中 5龄家蚕有23条蛋白带,主带有11条(82、79、60、51、46、38、32、30、28、24和18 kD).选用家蚕过敏患者阳性血清进行免疫印迹,1～4龄家蚕均显示出82和79 kD的特异性变应原;但只有5龄家蚕的30 kD蛋白为特异性变应原,通过离子交换层析和经切胶纯化出30 kD蛋白,再经MALDI-TOF-MS鉴定该蛋白为外膜蛋白.提示家蚕不同时期抗原成分有所变化,5龄家蚕新出现的30 kD蛋白为特异性变应原.