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摘要
第1章绪论
1．1胆固醇与人体健康
1．2乳酸菌降胆固醇作用
1．3胆盐水解酶的来源
1．4胆盐水解酶的作用
1．4．1对于产生菌自身的作用
1．4．2对于宿主的作用
1．5胆盐水解酶降胆固醇机制
1．5．1胆盐的合成与代谢
1．5．2降解机制
1．6胆盐水解酶研究现状
1．6．1胆盐水解酶的筛选方法
1．6．2胆盐水解酶酶学性质
1．6．3胆盐水解酶基因的克隆与表达
1．6．4胆盐水解酶分子结构
1．7研究的意义与内容
第2章产胆盐水解酶乳酸菌的筛选及其益生特性研究
2．1材料与仪器
2．1．1主要材料及试剂
2．1．2培养基与试剂配制
2．1．3主要仪器及设备
2．2实验方法
2．2．1菌种的活化和培养
2．2．2产胆盐水解酶菌株的筛选
2．2．3胆盐水解酶活力的测定
2．2．4菌种鉴定
2．2．5胆固醇测定
2．2．6乳酸菌益生特性测定
2．2．7数据统计与分析
2．3结果与分析
2．3．1胆盐水解酶阳性菌株定性筛选结果分析
2．3．2胆盐水解酶活性定量分析
2．3．316S rDNA测序结果及分析
2．3．4乳酸菌降胆固醇能力分析
2．3．5菌株耐酸耐胆盐能力分析
2．3．6菌株耐渗透压能力分析
2．3．7菌株表面疏水性及自聚集能力分析
2．4本章小结
第3章胆盐水解酶表达影响因素研究
3．1材料和仪器
3．1．1主要材料和试剂
3．1．2培养基与试剂配制
3．1．3主要仪器及设备
3．2实验方法
3．2．1胆盐水解酶活力测定
3．2．2胆盐水解酶产酶曲线测定
3．2．3营养因子对胆盐水解酶表达的影响
3．2．4培养环境对胆盐水解酶表达的影响
3．2．5乳酸菌存活率变化测定
3．2．6数据统计与分析
3．3结果与分析
3．3．2氮源对于胆盐水解酶表达影响
3．3．3碳源对于胆盐水解酶表达影响
3．3．4初始pH对于胆盐水解酶表达影响
3．3．5培养温度对于胆盐水解酶表达影响
3．3．6底物浓度对于胆盐水解酶表达影响
3．3．7硫代巯基乙酸钠对胆盐水解酶表达的影响
3．4本章小结
第4章胆盐水解酶重组酶学性质研究
4．1材料和仪器
4．1．1主要材料与试剂
4．1．2培养基与试剂配制
4．1．3主要仪器及设备
4．2实验方法
4．2．1质粒的提取
4．2．3引物的设计
4．2．4目的基因扩增
4．2．5胶回收目的片段
4．2．6载体构建
4．2．7大肠感受态的制备
4．2．8连接产物转化大肠感受态细胞
4．2．9胆盐水解酶异源表达酶活测定
4．2．10数据统计与分析
4．3结果与分析
4．3．1目的基因的扩增与载体构建
4．3．2核苷酸序列分析
4．3．3重组菌酶学性质测定
4．4本章小结
第5章胆盐水解酶活性位点分析
5．1材料和仪器
5．1．1主要材料和试剂
5．1．2培养基
5．1．3主要仪器及设备
5．1．4软件及网站
5．2实验方法
5．2．1氨基酸序列分析及同源建模
5．2．2分子对接
5．2．3突变菌株构建
5．2．4突变菌株酶活测定
5．2．5数据统计与分析
5．3结果与分析
5．3．1活性中心与底物结合口袋的鉴别
5．3．2蛋白叠合与分子对接
5．3．3突变体酶活分析
5．4本章小结
全文总结与展望
总结
展望
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文目录
致谢
扬州大学;
