声明
第一章 绪论
1.1髓源性抑制细胞MDSCs（Myeloid-derived suppressor cells）
1.1.1 MDSCs的起源和分化
1.1.2 MDSCs的表型和特征
1.1.3 MDSCs发挥免疫抑制功能的机制
1.1.4 MDSCs的靶向治疗
1.2长链非编码RNAs（Long noncoding RNAs,lncRNAs）
1.2.1 LncRNAs的概述
1.2.2 LncRNAs的作用机制
1.2.3 LncRNAs在髓系细胞和淋巴细胞中的作用
1.2.4 LncRNAs与MDSCs
1.3EZH2（histone methyltransferase Enhancer of Zeste homolog 2）
1.3.1 EZH2的概述
1.3.2 EZH2与细胞分化
1.4 本研究的目的、方法、实验设计及意义
1.4.1 研究目的
1.4.2 实验方法
1.4.3 实验设计
1.4.4 本研究的意义
第二章LncRNA Snhg6对MDSCs分化的调控
2.1 实验仪器和材料
2.1.1 实验动物与细胞株
2.1.2 实验仪器和耗材
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验主要溶液的配制
2.2 实验方法
2.2.1 小鼠Lewis肺癌细胞的培养
2.2.2 小鼠Lewis肺癌移植瘤模型的构建
2.2.3 小鼠脾脏和肿瘤组织来源MDSCs的分离纯化
2.2.4 LncRNA表达谱的检测和分析
2.2.5 小鼠骨髓细胞体外诱导MDSCs体系的建立
2.2.6 qRT-PCR检测lncRNA Snhg6的表达
2.2.7 荧光显微成像及qRT-PCR检测特异性si-Snhg6的转染效率
2.2.8 FCM检测MDSCs及其亚群的比例和数量
2.2.9 图像与统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1LncRNA Snhg6在肺癌移植瘤小鼠肿瘤组织来源MDSCs中高表达
2.3.2 TCCM可以促进lncRNA Snhg6表达诱导MDSCs的分化
2.3.3GM-CSF联合IL-6体外诱导MDSCs促进lncRNA Snhg6的表达
2.3.4 体外诱导MDSCs分化过程中特异性si-Snhg6转染效率的检测
2.3.5 LncRNA Snhg6对MDSCs分化的调控作用
2.4 讨论
第三章 LncRNA Snhg6降低EZH2蛋白稳定性参与调控MDSCs的分化
3.1 实验仪器和材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 实验仪器和耗材
3.1.3 实验试剂
3.1.4 实验主要溶液的配制
3.2 实验方法
3.2.1FISH检测lncRNA Snhg6的亚细胞定位
3.2.2核浆分离联合qRT-PCR检测lncRNA Snhg6的亚细胞定位
3.2.3 qRT-PCR检测转染特异性si-Snhg6后EZH2的表达
3.2.4Western blot检测转染特异性si-Snhg6后EZH2的表达
3.2.5Western blot检测EZH2的蛋白稳定性
3.2.6 IP检测EZH2泛素化水平
3.2.7 图像与统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1LncRNA Snhg6主要表达于MDSCs的细胞质中
3.3.2 抑制lncRNA Snhg6促进EZH2蛋白水平的表达
3.3.3体外诱导MDSCs过程中lncRNA Snhg6调控EZH2蛋白稳定性
3.3.4体外诱导MDSCs过程中lncRNA Snhg6调控EZH2的泛素化
3.4 讨论
第四章LncRNA Snhg6对MDSCs免疫抑制功能的调控
4.1 实验仪器和材料
4.1.1实验动物与细胞系
4.1.2 实验仪器与耗材
4.1.3 实验试剂
4.1.4 实验主要溶液的配制
4.2 实验方法
4.2.2 小鼠Lewis肺癌细胞移植瘤模型的构建
4.2.3 免疫磁珠法分离纯化小鼠脾脏中CD4+T细胞
4.2.4 肺癌移植瘤小鼠肿瘤组织中MDSCs的分离纯化
4.2.5 qRT-PCR检测特异性si-Snhg6转染肿瘤组织MDSCs的效率
4.2.6 CFSE标记法检测MDSCs对CD4+T细胞增殖的免疫抑制作用
4.2.7 MDSCs免疫抑制功能相关效应分子的检测
4.2.8 图像与统计学分析
4.3 实验结果
4.3.1肿瘤组织来源MDSCs中特异性si-Snhg6转染效率的检测
4.3.2 LncRNA Snhg6不影响MDSCs对CD4+T细胞增殖的抑制作用
4.3.3LncRNA Snhg6不影响MDSCs相关免疫抑制效应分子的表达
4.4 讨论
第五章 结论、创新点与展望
5.1 主要结论
5.2 创新点
5.3 展望
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表的论文
江苏大学;
