8-苯基黄嘌呤酰胺衍生物的设计、合成及其抑制MAO-B与抗肿瘤活性研究

摘要

目的
　　 以8-苯基黄嘌呤为母核进行结构修饰合成一系列衍生物，对其MAO-B抑制率、和抗肿瘤活性进行研究。
　　 方法
　　 1．本文先采用带有不同取代的苯甲酰氯、肉桂酰氯与对胺基苯甲酸或者间胺基苯甲酸在二氮甲烷中进行酰化反应，得到中间体，然后用该中间体与合成的5，6-二氨基-1，3-二甲基脲嘧啶在EDAC催化下脱水形成酰胺键，再用氢氧化钠在一定温度下进行环合，CH3I进行甲基化合成目标化合物。通过IR、1H-NMR、ESI-MS对结构进行确认。
　　 2．用蛋白含量测定试剂盒，加入不同浓度梯度的目标化合物溶液抑制MAO-B，并以二氢嗅犬脲胺为底物与剩余MAO-B结合生成荧光物质4-氢奎宁采，用荧光检测法在242nm下测定其吸光值，间接计算出合成的化合物对MAO-B活性抑制能力。
　　 3．采用MTT法对目标化合物在20μM浓度下对人结肠癌细胞HT-29，人子宫颈癌细胞Hela，结肠癌细胞株SW620，人肝癌细胞株HepG2的抗肿瘤活性进行初筛。对具有较好抑制率的部分化合物进行浓度梯度测试计算出IC50值。
　　 结果
　　 1．合成12个未见文献报道的新化合物(XD1-XD12)。目标化合物的结构均经过ESI-MS、IR、1H-NMR确认。
　　 2．化合物进行体外MAO-B抑制活性测试结果显示：合成的目标化合物均对MAO-B均有较好的抑制作用，其中化合物XD1、XD2、XD3、XD4抑制常数均较低。抑制能力最好的化合物XD1Ki=0.52μM为8-（3-C1-苯基）咖啡因
　　 (Ki=36μM)的70倍。合成的化合物XD3、XD4对MAO-B的抑制作用要强于化合物XD9、XD10。同时目标化合物间位氯取代对MAO-B的抑制有优势。而黄嘌呤7-位甲基化对MAO-B抑制活性影响不大。
　　 3．目标化合物中XD1-XD8对四种肿瘤细胞的抑制作用不明显，而XD9-XD12对四种肿瘤细胞都具一定的抑制生长作用，且这四个化合物随着浓度增大，药物作用增强，呈现较好的剂量依赖性。化合物的IC50值接近阳性对照药。
　　 结论
　　 1．合成的两个系列的黄嘌呤衍生物为新化合物，结构均经过IR、1H-NMR、ESI-MS确认。
　　 2．合成的化合物对MAO-B均有一定的抑制作用，其中黄嘌呤8-位采用苯甲酰氨基取代的化合物XD1、XD2、XD3、XD4对MAO-B的抑制常数均较低；这显示苯甲酰氨基取代系列优于苯乙烯甲酰氨基系列。比较XD3、XD4与XD5、XD6的抑制率显示：苯环有间氯取代对MAO-B的抑制有优势；而黄嘌呤7-位甲基化对MAO-B抑制活性影响不大。
　　 3．合成的化合物中XD9-XD12对人结肠癌细胞HT-29、人子宫颈癌细胞Hela、结肠癌细胞株SW620、人肝癌细胞株HepG2肿瘤细胞具有一定的抑制生长作用。这类化合物的共同点是采用了苯乙烯甲酰氨基取代。这提示我们苯乙烯甲酰氨基可能对肿瘤细胞的活性有影响。黄嘌呤类化合物作为抗肿瘤药物的代谢后产物不能干扰、抑制RNA和DNA的合成，达到杀伤各期增殖细胞的作用。抗肿瘤作用有限。