单酰基甘油脂肪酶抑制剂JZL184对结直肠癌细胞增殖凋亡迁移的影响及其作用机制

摘要

背景：脂肪代谢及脂质分子与肿瘤关系密切。单酰胺基脂肪酶(MAGL)主要参与人体内甘油三脂代谢生成游离脂肪酸（FFAs）。最新研究表明，单酰基甘油脂肪酶通过调节脂肪酸网络提高肿瘤细胞致病性及侵袭性。并且抑制 MAGL基因或活性后，一些与肿瘤密切相关的脂质分子如溶血磷脂（LPA），前列腺素 E2(PGE2)等水平随 FFAs水平发生变化。MAGL-FFAs通路调节脂肪酸网络从而影响肿瘤侵袭性，MAGL是其中关键的节点。在结肠癌中MAGL高表达与肿瘤组织中，并且抑制MAGL基因表达及活性会导致结直肠癌细胞株增殖减弱，凋亡增多，细胞周期阻滞，侵袭能力下降，其可能与Cyclin D1及Bcl-2有关，但是MAGL与细胞凋亡及肿瘤迁移之间的关系仍不明确。本实验旨在探索JZL184抑制MAGL活性对结直肠癌细胞系增殖、凋亡和迁移影响，寻求结直肠癌治疗新的靶点及治疗方法。
　　目的：研究MAGL抑制剂JZL184对结直肠癌细胞系细胞增殖、细胞凋亡、转移能力及对化疗药物敏感性的影响及其机制。
　　方法：本实验首先利用JZL184干预结直肠癌细胞系，通过MTT检测JZL184对结直肠癌细胞系增殖能力的影响，及JZL184联合5-FU与单用5-FU对肿瘤影响有无差异，流式细胞技术分别检测JZL184对结直肠癌细胞凋亡的影响以及比较L184联合不同浓度的5-FU与单用5-FU对结直肠癌细胞系凋亡影响的差异。然后Transwell检测JZL184对不同转移潜能的SW480及SW620细胞系细胞迁移的影响。之后利用Realtime-PCR和Western-blot检测Bcl-2及Bax基因及蛋白水平的变化。最后利用Western-blot检测其他细胞凋亡分子pro-Caspase8和pro-Caspase3、与上皮间充质转化有关的分子以及AKT-mTOR通路中p-AKT及p-mTOR蛋白水平的变化。
　　结果：JZL184可抑制结直肠癌细胞系 SW480、Lovo、HCT116细胞增殖并诱导结直肠癌细胞系细胞凋亡增多。JZL184联合不同浓度的5-FU与单用5-FU相比，可提高结直肠癌细胞系细胞凋亡并抑制细胞增殖。随后我们利用JZL184干预具有不同转移潜能的SW480及SW620,发现JZL184可抑制两种细胞系细胞迁移并且其抑制SW620的效果要强于SW480。最后我们通过Western blot及Real-time PCR检测，发现与凋亡相关BCL的-2 mRNA及蛋白水平下降，Bax的mRNA及蛋白水平上升,E-cardherin蛋白水平上升，Pro-Caspase8、pro-Caspase3、p-AKT、p-mTOR、Vimentin及Snail蛋白水平下降。
　　结论：JZL184可抑制结直肠癌细胞系细胞增殖及迁移，促进肿瘤细胞凋亡，增加肿瘤细胞对5-FU敏感性。其机制可能是 JZL184调控与凋亡有关的 BCL-2/Bax和pro-Caspase8/pro-Caspase3表达水平从而促进细胞凋亡，影响EMT相关蛋白表达从而抑制肿瘤细胞迁移能力。并且JZL184可能通过AKT-mTOR通路调节上述分子从而影响肿瘤细胞凋亡及转移。

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第一部分 JZL184抑制结直肠癌细胞系细胞增殖能力及诱导肿瘤发生细胞凋亡

前言

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实验材料与实验方法

实验结果

讨论

参考文献

第二部分 JZL184抑制结直肠癌细胞系细胞增殖、诱导细胞凋

前言

摘要

实验材料与实验方法

实验结果

讨论

参考文献

综述：MAGL与肿瘤关系及其机制的研究进展

附录一缩略词一览表

附录二 攻读学位期间发表论文目录

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