声明
摘要
第一章 单酰基甘油酯脂肪酶研究背景介绍
第一节 癌症研究的综述
1.1.1 癌症
1.1.2 癌症的诱发因素
1.1.3 癌症的治疗方法
第二节 单酰基甘油酯脂肪酶的介绍
1.2.1 单酰基甘油酯脂肪酶的作用
1.2.2 单酰基甘油酯脂肪酶与癌症的关系
1.2.3 单酰基甘油酯脂肪酶的结构特征
第三节 高通量药物筛选方法的介绍
1.3.1 高通量药物筛选技术的概念
1.3.2 高通量筛选模型
1.3.3 高通量药物筛选检测技术
第四节 高通量筛选的化合物库
1.4.1 化合物样品的来源
1.4.2 小分子化合物库的制备
1.4.3 小分子化合物库的研究手段
第二章 单酰基甘油酯脂肪酶的表达纯化
第一节 引言
2.1.1 分子克隆技术
2.1.2 蛋白表达系统
2.1.3 蛋白质的分离纯化
2.1.4 蛋白质结晶
第二节 实验材料
2.2.1 基因,质粒和菌株
2.2.2 工具酶及相关试剂盒
2.2.3 培养基的配制
2.2.4 主要试剂及缓冲液的配制
2.2.5 主要的实验仪器
第三节 实验方法
2.3.1 蛋白的基本特征
2.3.2 pET-28a-MAGL重组质粒的构建
2.3.3 蛋白质的表达纯化
2.4.4 pGEX-6p-1-MAGL重组质粒的构建及蛋白的表达纯化
2.5.5 定点突变pGEX-6p-1-Mut
2.6.6 蛋白结晶
第三章 单酰基甘油酯脂肪酶的抑制剂的筛选
第一节 引言
3.1.1 荧光检测技术
3.1.2 细胞活性测定方法
第二节 实验材料
3.2.1 蛋白,细胞
3.2.2 主要试剂
3.2.3 主要实验仪器
第三节 实验方法
3.3.1 分子水平上抑制剂的筛选
3.3.2 细胞水平上药物的检测
第四章 结果分析与讨论
第一节 单酰基甘油酯脂肪酶的表达纯化
4.1.1 分子克隆
4.1.2 重组质粒的鉴定
4.1.3 蛋白质的纯化
4.1.4 蛋白质结晶
4.1.5 讨论
第二节 单酰基甘油酯脂肪酶的抑制剂的筛选
4.2.1 分子水平上抑制剂的筛选
4.2.2 细胞水平上化合物的检测
4.2.3 讨论
全文总结
参考文献
致谢
个人简历及研究成果
南开大学;