明日叶总黄酮提取、纯化分离以及抗氧化活性的研究

摘要

明日叶是一种药食兼用的植物，富含黄酮类物质、香豆素、有机锗、维生素B12等多种有效成分。在临床上常用来治疗泌尿和便秘。本文主要对明日叶中主要有效成分-黄酮的提取和纯化工艺进行了研究，并对其进行了分离鉴定，最后对黄酮类物质的抗氧化活性进行了研究，为明日叶的开发和应用提供理论参考。
　　本研究结论如下:
　　（1）以总黄酮提取率为指标，通过单因素实验考察乙醇体积分数、提取温度、料液比、提取时间对黄酮提取率的影响，运用Box-Behnken设计响应面优化明日叶总黄酮的提取工艺，确定最佳提取条件：53％（v.v-1）乙醇，17:1（mL/ g）的液料比，温度为82℃，提取时间为2h；
　　（2）以吸附率和解析率为指标，采用静态-动态吸附与解析相结合的方法，从12种树脂中筛选出纯化明日叶总黄酮最佳的树脂并对其纯化工艺条件进行探讨。结果表明：HPD-600大孔树脂对明日叶总黄酮有较好的吸附、解析效果。最佳纯化条件为：上柱液总黄酮质量浓度控制在2mg/mL～3mg/mL之间，以3BV/h的流速过柱，树脂达吸附饱和的上样量为2.7BV；洗脱条件为：用蒸馏水冲洗至无色后，改用4BV，50%乙醇以2BV/h流速进行洗脱。经 HPD-600树脂纯化后，明日叶总黄酮含量由4.46%提升至36.96%，提升近8倍。
　　（3）为追踪明日叶抗氧化活性部位，将明日叶粗提取物过HPD-600大孔树脂，收集50%乙醇洗脱物。采用不同极性有机溶剂对50%洗脱物进行液-液萃取，将50%洗脱物分为乙酸乙酯相、正丁醇相、水相三个不同极性溶剂萃取物，测定不同极性溶剂萃取物的总黄酮含量，研究各萃取物清除DPPH自由基、ABTS+自由基能力和总还原能力。结果表明：乙酸乙酯相的总黄酮含量高于其他溶剂相，且体外抗氧化能力最强。
　　（4）采用中压柱色谱及高效液相色谱等分离方法，从明日叶乙酸乙酯部分分离出2个化合物单体，运用1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等方法，结合文献数据，鉴定其分别为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（quercetin-3-O-β-D-glucopyranside)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷（luteolin-7-O-β-D-glucpyranoside)，并对其抗氧化活性进行测定，结果表明：两个化合物均有较强的抗氧化活性。

目录

第一章 前言

1.1 明日叶概述

1.2 明日叶的化学成分

1.3 黄酮类化合物研究概况

1.4 黄酮类化合物的提取方法

1.5 黄酮的分离纯化方法

1.6 研究意义

1.7 主要内容

第二章 回流法提取明日叶总黄酮的工艺研究

2.1 实验材料、试剂及仪器

2.2 实验方法

2.3 结果与讨论

2.4 本章小结

第三章 大孔树脂纯化明日叶总黄酮的工艺研究

3.1 实验材料、试剂与仪器

3.2 实验方法

3.3 结果与分析

3.4 验证试验

3.5 本章小结

第四章 明日叶黄酮样品的抗氧化活性研究

4.1 材料、试剂与仪器

4.2 实验方法

4.3 结果与分析

4.4 本章小结

第五章 明日叶黄酮的分离、结构鉴定

5.1 材料、试剂及仪器

5.2 实验方法

5.3 实验结论

5.4 本章小结

第六章 结论与展望

6.1 结论

6.2 展望

参考文献

附图

致谢

攻读学位期间取得学术成果

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