泥螺糖胺聚糖的提取、纯化与功能活性研究

摘要

糖胺聚糖(Glycosaminoglycans，GAGs)是由不同的重复二糖单元组成的线性多糖，具有多种功能活性，如抗凝血、抗肿瘤、降血脂等。研究表明，海洋生物中含有丰富的糖胺聚糖。泥螺是一种具有研究开发潜力的海洋生物，对其进行药学研究和保健品开发可以充分利用我国丰富的海洋生物资源，为泥螺的高值化开发利用提供理论依据，为新型药物先导化合物的开发探索一条新途径，具有重要的理论和实践意义。本研究的主要内容如下:
　　在单因素试验的基础上，利用Design expert 7.0软件和响应面分析相结合的方法优化泥螺糖胺聚糖提取工艺。建立了二次多项式回归模型，该模型能较好的反映各因素与响应值之间的关系，确定泥螺糖胺聚糖的最佳提取工艺条件为液料比2∶1，酶解时间7.5h，酶添加量0.80％，在此条件下，泥螺糖胺聚糖的提取率可达0.265％。
　　采用吸附法、超滤法和等电点沉淀法对糖胺聚糖粗品进行一次纯化，以除去蛋白质、色素和无机盐等杂质，得GAG-1，回收率47.75％，糖胺聚糖含量由21.50％提高到65.20％;采用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）络合法进行二次纯化得GAG-2，回收率为62.14％，糖胺聚糖含量由65.20％提高到90.82％。
　　对纯化后的糖胺聚糖进行紫外光谱扫描和琼脂糖凝胶电泳。紫外光谱扫描结果显示，纯化后的糖胺聚糖在260nm和280nm附近没有明显的吸收峰，说明纯化后的样品中蛋白质和核酸含量很低，杂质基本被除去;琼脂糖凝胶电泳显示，与标准品相比，泥螺糖胺聚糖图谱斑点有明显的拖尾，表明泥螺糖胺聚糖中糖胺聚糖种类不均一或分子量分散性较大。
　　采用明胶-BaCl2法、咔唑比色法和Ehrlich法测定纯化的糖胺聚糖的化学组成，结果显示，泥螺糖胺聚糖中硫酸根含量为3.95％，糖醛酸含量为25.83％，氨基糖含量为14.19％。
　　KBr压片法进行了泥螺糖胺聚糖的红外吸收光谱分析，显示泥螺糖胺聚糖中含有-OH(3400cm-1)、-COO-(1639cm-1)、-SO2(1421cm-1)、C-O-C（糖环，1023cm-1)等结构或基团。
　　对泥螺糖胺聚糖体外清除自由基功能、体外抗凝血作用及抗肿瘤效果进行了研究。结果表明，泥螺糖股聚糖对羟自由基·OH有较强的清除作用，但其对超氧阴离子自由基O2-·几乎没清除作用;泥螺糖胺聚糖具有一定的抗凝血活性，能够显著延长新西兰兔血浆的PT值、TT值和APTT值;泥螺糖胺聚糖有一定的抗肿瘤活性，其活性随糖胺聚糖浓度的增加而显著增强。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 糖胺聚糖研究概况

1．1．1 糖胺聚糖的分类及结构

1．1．2 糖胺聚糖的提取、分离与纯化

1．1．3 糖胺聚糖的分析测定

1．1．4 糖胺聚糖的功能活性研究

1．2 泥螺研究概况

1．2．1 泥螺的生态习性

1．2．2 泥螺的外部形态

1．2．3 泥螺的药用价值

1．3 海洋动物糖胺聚糖的研究现状

1．4 本课题研究的内容和目的意义

1．4．1 研究的主要内容

1．4．2 研究的目的和意义

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 生物材料

2．1．2 药品及试剂

2．1．3 主要仪器及设备

2．2 实验方法

2．2．1 泥螺糖胺聚糖的提取纯化

2．2．2 泥螺糖胺聚糖主要化学组成与结构分析

2．2．3 泥螺糖胺聚糖功能活性研究

3 结果与分析

3．1 糖胺聚糖提取纯化

3．1．1 糖胺聚糖标准曲线

3．1．2 泥螺糖胺聚糖提取条件优化

3．1．3 泥螺糖胺聚糖的纯化

3．1．4 泥螺糖胺聚糖的紫外吸收光谱

3．1．5 泥螺糖胺聚糖的琼脂糖凝胶电泳

3．2 泥螺糖胺聚糖的化学组成与结构分析

3．2．1 泥螺糖胺聚糖的化学组成分析

3．2．2 泥螺糖胺聚糖红外光谱分析

3．3 泥螺糖胺聚糖的功能活性研究

3．3．1 泥螺糖胺聚糖的体外抗氧化作用

3．3．2 泥螺糖胺聚糖的体外抗凝血作用

3．3．3 泥螺糖胺聚糖的体外抗肿瘤作用

4 结论

4．1 泥螺糖胺聚糖提取工艺的优化

4．2 泥螺糖胺聚糖的纯化

4．3 泥螺糖胺聚糖的化学组成分析

4．4 泥螺糖胺聚糖的红外光谱分析

4．5 泥螺糖胺聚糖功能活性研究

5 展望

参考文献

7 攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢