微生物酯酶产生菌的选育、菌株Bacillus sp. EB-87产酶特性及酶学性质的研究

摘要

微生物酯酶在生物转化和动力学拆分方面具有广阔的应用前景,因面该文对产酶微生物酶菌种的选育、菌株的鉴定、Bacillus sp. Strain EB-87产酶特性以及酶学性质做了系统的研究.通过比较试验,建立起一个有效、简例、快速的筛选模型.采用富集法、添加溴甲酚紫酯酶染色液的快速平板显色法和发酵测酶活对与酯类长期接触的30多份土样以及实验室保存在菌种进行大量的筛选.为了弄清楚Bacillus sp. Strain EB-87的产酶机理和提高其产酶水平,采用单因素试验,Plackett-Burman法和响应面回归分析相结合进行产酶牧场生研究.最后,对分离纯化后的酶做温度、pH、底物特异性以及酶的动力学研究.

目录

文摘

英文文摘

第一章文献综述

1.1立题背景及研究意义

1.2酯酶的作用机制与分类

1.2.1 A类、B类和C类酯酶及其作用机制

1.2.2酯酶的标准分类和磷脂酶的作用机制

1.2.3特异性酯酶和非特异性酯酶及其作用机制

1.2.4动植物及微生物酯酶

1.3微生物酯酶的研究概况

1.3.1产微生物脂肪酶及酯酶菌种的选育概况

1.3.2酯酶的最新研究进展

1.4微生物酯酶和脂肪酶的应用研究

1.4.1微生物酯酶与脂肪酶的比较研究

1.4.2在医药工业中的应用研究

1.4.3在食品工业中的应用研究

1.4.4在日用化工品及其它方面中的应用研究

第二章产微生物酯酶菌种的筛选

2.1材料与方法

2.1.1实验仪器

2.1.2实验试剂

2.1.3主要试剂的配制

2.1.4实验方法

2.2酯酶产生菌的初筛

2.2.1土样及菌种来源

2.2.2酯酶产生菌的初筛培养基

2.2.3初筛方法与步骤

2.2.4初筛结果与讨论

2.3酯酶产生菌的复筛

2.3.1酯酶产生菌的复筛培养基

2.3.2复筛方法与步骤

2.3.3复筛结果与讨论

2.3.4酯酶的特异性底物筛选试验

2.4本章小结

第三章产酯酶菌株EB-87的鉴定

3.1材料与方法

3.1.1实验仪器

3.1.2实验试剂

3.1.3实验方法

3.2菌株EB-87的分离和纯化

3.2.1鉴定菌株来源

3.2.2分离纯化培养基

3.2.3菌株EB-87的分离、纯化

3.3 菌株EB-87的鉴定结果与讨论

3.3.1菌株EB-87鉴定所用培养基

3.3.2菌株EB-87的形态特征的鉴定

3.3.3菌株EB-87生理生化特征鉴定

3.3.4菌株EB-87生长特性鉴定

3.4本章小结

第四章菌株Bacillus sp.EB-87产酶特性的研究

4-材料与方法

4.1.1实验仪器

4.1.2实验试剂

4.1.3主要试剂的配制

4.1.4实验方法

4.2菌株Bacillus sp.EB-87的发酵性能研究

4.2.1基础培养基的组成(%)

4.2.2菌株Bacillus sp.EB-87的生长曲线测定

4.2.3菌株Bacillus sp.EB-87发酵生化曲线

4.3菌株Bacillus sp.EB-87产酶特性的研究

4.3.1培养基组成对菌株Bacillus sp.EB-87产酶试验

4.3.2发酵条件对产酯酶的影响

4.3.3酯类、脂肪酸脂以及结构类似物对Bacillus sp.Strain EB-87产酶的影响

4.3.4 Plackett-Burman设计对Bacillus sp.Strain EB-87产酶条件的优化

4.3.5响应面分析(RSA)优化培养基的组成

4.4本章小结

第五章Bacillus sp.Strain EB-87酯酶的酶学性质研究

5.1材料与方法

5.1.1实验仪器

5.1.2实验试剂

5.1.3主要试剂的配制

5.1.4实验方法

5.2 Bacillus sp.Strain EB-87酯酶的酶学特性研究

5.2.1 Bacillus sp.Strain EB-87酯酶的分离、纯化

5.2.2 Bacillus sp.Strain EB-87酯酶的基本性质研究

5.2.3 Bacillus sp.Strain EB-87酯酶底物特异性试验

5.3 Bacillus sp.Strain EB-87酯酶的动力学研究

5.3.1底物标准曲线的绘制

5.3.2酶促反应时间进程曲线

5.3.3酶活力与酶浓度的曲线

5.3.4动力学参数的测定

5.4本章小结

第六章结论

参考文献

本论文的创新之处与建议

附录

致谢