产柚苷酶菌株的诱变选育、产酶特性研究及酶学性质表征

摘要

柚皮苷作为黄酮类化合物的主要代表物质之一,主要存在于未成熟的柑橘类果皮中.柑橘类果汁中往往含有大量的柚皮苷物质,使得果汁产生较重的苦味.柚苷酶主要用于除去柑橘类果汁中的柚皮苷.利用微生物产生的柚苷酶进行脱苦是一种理想、经济的方法,且已成为此行业的关注焦点.本文采用紫外和微波联合诱变方法对从自然界筛选得到的柚苷酶产生菌进行诱变育种;研究诱变后菌株的产酶特性以及粗酶酶学性质,并对柚苷酶进行分离纯化;最后探究其对柑橘类果汁脱苦的应用效果.rn 从自然界中筛选获得15株产柚苷酶的菌株，选择其中一株酶活力最高的菌株进行形态学以及18S rDNA鉴定，确定为黑曲霉并命名为Asperillus niger N-01。以此为出发菌株，采用紫外-微波联合诱变技术处理，突变菌株A.niger N-132产酶能力达到81.50U/mL，酶活力较原始菌株提高4.7倍，且具有较好的遗传稳定性。rn 对突变菌株A.niger N-132的产酶条件进行优化。确定A.niger N-132的液体产酶培养基配方为:桔皮粉(30目-120目)2.7%，豆渣0.5%，酵母膏2.0%, KH2PO4 1.0%, Na2HPO4 0.1%，MgSO4`7H2O1.0mmol/L,FeC13 1.0mmol/L，CaCl2 1.0mmol/L，培养基初始pH5.0-6.0;培养温度30℃，接种量5.0%，装液量30mL/250mL，在上述条件下产酶水平可达到114.68U/mL。固态发酵基质中，确定桔皮粉与豆渣的最适比例为2:1;接种量20%，培养基初始pH为6.5，培养温度30℃。在上述条件下发酵，菌株在108h-168h处于产酶高峰期，最高酶活力可达到2163.74U/g干曲;同时确定从湿曲提取柚苷酶的最佳固液比与浸提时间分别为1:6和5.5h.