壳聚糖酶产生菌筛选、诱导条件优化、动力学研究

摘要

论文对所筛选到的壳聚糖酶产生菌Trichoderma viride867进行了产酶条件研究和动力学研究.并采用动力学方法研究了脲对壳聚糖酶活力的抑制作用.使用菌丝培养和诱导产酶两步分离法发酵生产壳聚糖酶.通过产酶条件研究发现氨基葡萄糖是产酶的有效诱导物.最佳产酶条件为:菌龄40h,培养时间36h,培养温度30℃,培养基初始pH7.0,转速200rpm,培养基中添加氨基葡萄糖0.01％,粉末壳聚糖2.0％,吐温80 0.1％,大量元素溶液10mL,微量元素液lmL,蛋白胨、酵母膏和牛肉膏各0.1％,摇瓶装液量100mL.在最佳产酶条件下壳聚糖酶的产量为4.82U/mL.Trichoderma viride867所产壳聚糖酶的底物专一性强,对胶体几丁质和CMC都没有降解能力.壳聚糖酶在pH5.0~6.0的微酸性环境中催化能力最强,也最不容易失活.最适反应温度为55℃,温度高于60℃,酶的失活加剧.重金属离子和尿素对壳聚糖酶有较强的抑制作用,Ca<'2+>对酶具有一定的激活作用.壳聚糖酶的米氏常数K<,m>为10.14g/L,V<,max>为O.163g/L·min.通过动力学方法推导出脲是壳聚糖酶的竞争性抑制剂,lmol/L脲对酶的抑制常数K<,i>为0.762mol/L.

目录

文摘

英文文摘

第一章 文献综述

1.1几丁质与壳聚糖概述

1.1.1几丁质和壳聚糖的来源与生产

1.1.2几丁质和壳聚糖的结构与性质

1.1.3壳寡糖的性质

1.2壳聚糖和壳寡糖的应用

1.2.1保健食品，食品贮藏领域

1.2.2医药领域

1.2.3化妆品

1.2.4农业

1.2.5氨基葡萄糖

1.3壳聚糖的降解

1.3.1化学法

1.3.2辐射法

1.3.3酶法

1.4壳聚糖酶

1.4.1壳聚糖酶的分布

1.4.2壳聚糖酶的作用模式

1.4.3壳聚糖酶的生产

1.4.4壳聚糖酶的分离纯化

1.4.5壳聚糖酶的分析方法

1.4.5壳聚糖酶的底物专一性

1.4.6壳聚糖酶的动力学

1.4.7pH与温度对壳聚糖酶活力的影响

1.4.8壳聚糖酶的激活剂与抑制剂

1.4.9国内研究概况

1.4.10壳聚糖酶的应用

第二章材料与方法

2.1菌种与实验材料：

2.1.1菌种

2.1.2培养基和培养条件

2.1.3试剂和溶液配制

2.2分析方法

2.2.1壳聚糖酶酶活测定

2.2.2还原糖测定

2.2.3菌丝的洗涤方法

2.2.4生物量测定

第三章壳聚糖产生菌的筛选

3.1组成型壳聚糖酶分布

3.2产诱导型壳聚糖酶微生物的筛选

3.2.1平板初筛

3.2.2摇瓶复筛

本章小结

第四章Trichoderma viride 867诱导产酶条件研究

4.1不同碳源对菌丝生长和壳聚糖酶产生的影响

4.2混合碳源发酵产壳聚糖酶的研究

4.3菌丝生长和诱导产酶分离两步法发酵产酶条件研究

4.3.1诱导物对产酶的影响

4.3.2不同诱导物作用下Trichoderma viride 867的产酶曲线

4.3.3氨基葡萄糖对Trichoderma viride867产壳聚糖酶的诱导机理

4.3.4最佳培养时间的确定

4.3.5无机盐对产酶的影响

4.3.6氮源对产酶的影响

4.3.7表面活性剂、初始pH、培养温度和转速的正交试验

本章小节

第五章壳聚糖酶的动力学研究

5.1壳聚糖酶的酶促反应动力学

5.1.1底物专一性

5.1.2最适反应pH

5.1.3最适反应温度

5.1.4壳聚糖酶的稳定性

5.1.5激活剂和抑制剂

5.1.6Trichoderma viride867壳聚糖酶的米氏常数的求取

5.2脲对壳聚糖酶活力的抑制动力学和机理

5.2.1脲浓度壳聚糖酶活力的影响

5.2.2不同浓度脲对酶反应速度的影响

5.2.3脲对壳聚糖酶的竞争性抑制动力学推导

本章小结

结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文