海马骨粉多肽制备及其抗氧化活性研究

摘要

海马作为一种具有极高药用价值的海洋药源生物，在我国一直被视为一种名贵中药，具有强身健体、补肾壮阳、舒经活络、消炎止痛、止咳平喘之功效，极具开发保健品潜力。随着海区天然资源的过度捕捞导致野生海马资源的匮乏，人工养殖已在我国形成了一定的布局，这也为海马深加工利用提供了一定的资源基础。本实验主要是以三斑海马为原料，利用超临界流体萃取技术对海马骨粉脂肪进行萃取工艺研究，并通过 GC-MS对其脂肪酸进行分析；然后应用响应面实验设计法对海马脱脂骨粉蛋白酶酶解工艺进行优化；最后再对酶解多肽进行分离并验证其抗氧化能力的大小。
　　（1）对成年三斑海马采用超临界萃取脂肪工艺研究中，萃取压强对海马骨粉酯类萃取率的影响最大，其次是萃取时间、萃取温度和 CO2流量；经正交实验得到萃取海马骨粉酯类的最佳工艺条件为：萃取压强35Mpa，萃取温度58℃，萃取时间135min，CO2流量15L/h。在此优化条件下，海马骨粉脂质萃取率为1.81％。经 GC-MS分析，所得萃取物中主要含15种脂肪酸，其中不饱和脂肪酸占总脂肪酸的39.10%，EPA和DHA分别占不饱和脂肪酸的5.55%和11.00%。
　　（2）在5种蛋白酶中筛选出两种酶解效果较好的酶进行单因子试验，并在单因子试验基础上，采用响应面法对两种单酶酶解工艺进行优化，在优化基础上进行复合酶解效果研究，最后对选取的最佳酶解效果的酶解液进行电泳，测定多肽分子量分布情况。碱性蛋白酶最佳酶解工艺为：温度54.70℃、pH9、时间6h；胰蛋白酶酶解工艺为：温度45℃、pH8.8、时间4h；复合酶解工艺选取先胰蛋白酶酶解再碱性蛋白酶酶解，复合酶解工艺最佳水解度为14.41%；海马酶解多肽更多的是在30kDa以下。
　　（3）通过利用葡聚糖 G-50层析系统来对海马酶解骨粉多肽进行分离，并对分离后的多肽根据出峰时间分为三个区间，然后分区间进行收集并干燥，再利用对多肽的还原力、DPPH清除率、超氧阴离子清除率、羟自由基清除率等进行测定其功能，表明海马骨粉多肽的还原力、DPPH自由基清除率、超氧阴离子自由基的清除率、羟基自由基（·OH）能力等方面表现出相同的趋势。三种分子量分布不同的海马骨粉多肽的抗氧化能力不一，且峰2所对应的多肽抗氧化能力要强于峰3，峰1的抗氧化能力则最弱。

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引言

1绪论

1.1海马概述

1.2海马的化学成分组成

1.3海马的药理作用

1.4生物活性肽的概述

1.5生物活性多肽的制备方法及其优缺点

1.6生物活性肽的功能及国内外研究现状

1.7生物活性肽的分离方法

1.8本论文研究内容

2海马骨粉超临界萃取脱脂工艺研究及其脂肪酸组成分析

2.1引言

2.2 材料

2.3实验方法

2.4结果与分析

2.5 讨论

2.6本章小结

3海马骨粉酶解多肽的制备工艺研究

3.1引言

3.2 材料与方法

3.3结果与分析

3.4讨论

3.5本章小结

4海马骨粉多肽抗氧化能力研究

4.1引言

4.2材料与方法

4.3方法

4.4结果

4.5讨论

4.6本章小结

5结论与创新点

5.1结论

5.2创新点

参考文献

在校研究成果

致谢