孔鳐软骨抗氧化和抗肿瘤多肽的制备及活性研究

摘要

本文以孔鳐(Raja porosa)软骨为实验材料,采用盐酸胍抽提、丙酮分级沉淀、蛋白酶酶解、超滤、DEAE-52阴离子交换层析、SephadexG-15凝胶层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)等技术,得到孔鳐软骨多肽DCPE-A,DCPE-B和DCPE-C,经氨基酸序列分析和质谱(ESI-MS)确定其结构分别为Phe-Ile-Met-Gly-Pro-Tyr(DCPE-A)和Gly-Pro-Ala-Gly-Asp-Tyr(DCPE-B)和Ile-Val-Ala-Gly-Pro-Gln(DCPE-C),分子量分别为726.9、578.58和583.69Da.体外抗氧化实验结果表明：DCPE-A、DCPE-B与DCPE-C对DPPH自由基(EC5o为3.83、4.21和4.45mg/l)、羟自由基(EC50为3.37、3.92和4.23mg/mL)、ABTS自由基(EC50为0.77、1.04和1.29mg/mL)和超氧阴离子自由基(EC50为1.61、1.66和1.82mg/mL)具有良好的清除作用,DCPE-C亦显示出了良好的脂质过氧化抑制作用.抗肿瘤活性表明：孔鳐软骨多肽DCPE-A,DCPE-B和DCPE-C的对人宫颈癌HeLa细胞的半数抑制率(IC50)分别为4.81、4.86和6.26mg/mL,DCPE-A显示出最强的增殖抑制作用.AO/EB染色观察显示DCPE-A能引起肿瘤细胞凋亡的形态学变化;通过流式细胞术结果可以看出随DCPE-A浓度的增加,HeLa细胞的早期凋亡率从4.54％增加到19.25％;Western blotting免疫印迹表明Bcl-2/Bax的比值急剧升高,且Caspase-3的蛋白表达水平也显著增加.研究结果表明软骨多肽DCPE-A可诱导HeLa细胞发生凋亡,为其应用于临床肿瘤治疗提供理论依据.